Purpan 2016 qcm 5

[sarah1331]

Bonjour, 

Ce qui me pose problème c'est que dans l'item B et C ils disent qu'avec tel ou tel anti-corps on peut déterminer spécifiquement la concentration totale de PSA-libre.

La forme libre est soit entière 33 kDa ou clivée 28 kDa (énoncé commun aux qcm). 

Mais pour moi l'AC5 est bien spécifique de la forme libre mais reconnaissant un epitope conformationnel on ne peut pas savoir avec l'immunotransfert (du qcm 4) s'il reconnait la forme entière ET la forme clivée (pour la "concentration TOTALE"). Je n'ai pas trouvé d'autres données permettant de le prouver.

Donc j'avais mis faux pensant que ce n'est peut être pas la concentration totale mais peut être simplement la concentration de PSA libre entière ou de PSA libre clivée...

qcm 5 : BCE vrai 

 

J'espère que mon problème est compréhensible

Merci d'avance 

[SimonR]

Salut ! 

 

Je comprends ton problème ^^. L'AC5 reconnait en effet un épitope conformationnel comme le montre l'immunotransfert en SDS PAGE où il y a une absence de marquage. L'ELISA est une méthode non dénaturante donc il y a une reconnaissance des AC5 pour les épitopes conformationnels. D'après les différentes expériences d'ELISA, AC5 reconnait la forme libre mais pas la forme liée et cela n'est pas dû à une quelconque dénaturation puisqu'on est en situation non dénaturante (contrairement en SDS PAGE). De ce fait, on peut en conclure que l'AC5 est spécifique de la forme libre et peut donc être utiliser pour doser spécifiquement PSA libre.

 

J'espère que j'ai pu répondre à ton problème sinon n'hésite pas à me poser davantage de questions  . 

[sarah1331]

Merci @SimonR pour ta réponse  mais je ne comprend pas qu’on puisse dire « oui on aura le PSA libre TOTAL » car on ne sait pas si l’anti corps lie le PSA libre entier ou clivé ou les deux. Imaginons qu’il reconnaisse un anticorps sur la partie qui sera ensuite clivée, on n’aura pas le PSA libre total si ?

[SimonR]

Ca n'a pas d'importance. En ELISA, AC5 reconnait la forme libre de PSA, c'est suffisant pour qu'on s'en serve pour mesurer la PSA libre. De plus, l'immunotransfert en PAGE SDS est une méthode dénaturante, donc il n'y a pas forcément une forme entière et une forme clivée mais plutôt 2 chaînes différentes qui constituent la PSA et qui sont séparées en condition dénaturante car si tu compares AC2 qui ne reconnait que la partie de 33 kDa et AC1 qui reconnait les 2 parties, AC2 marque autant la PSA libre que AC1 (même un peu plus mais ce n'est pas significatif à mon avis) en ELISA. Par conséquent, on a pas besoin d'avoir un AC qui marque les 2 chaînes, qui plus est l'item précise que la concentration sera déterminée en ELISA sandwich c'est-à-dire dans les mêmes conditions (non dénaturantes) qu'en ELISA. 

[sarah1331]

Pour moi ce n'est pas deux chaines à cause de la dénaturation mais bien la forme entière ou clivée car le poids moléculaire correspondent à l'énoncé :/ du coup je ne comprend pas trop mais peut etre que ca n'a pas d’intérêt alors. Merci en tout cas d'avoir pris le temps.

[SimonR]

Le poids moléculaire donné dans l'énoncé est celui de la hK2 recombinante pas celle de la PSA. Je démentis pas ce que tu dis : la recherche, c'est souvent une question d'interprétation donc ton interprétation peut être tout aussi vraie que la mienne. Cependant, en général, en SDS-PAGE, lorsqu'on étudie une protéine et une seule et qu'on trouve 2 bandes ou plus, on en déduit que la protéine contient de chaînes reliées entre elles par des liaisons non covalentes, liaisons qui sont donc rompues en conditions non dénaturantes. Désolé de ne pas avoir pu t'aider davantage :/ si tu as d'autres questions, n'hésite pas et bon courage pour la suite !