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CC 2017 - Génome - QCM 2 - item C


Larousse
Go to solution Solved by EmmaJu,

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Salut salut la compagnie !  :D 

 

J'ai un problème avec le CC 2017 de Génome, le qcm 2, item C.

Malgré la correction, je ne comprend pas pourquoi le site BtsC1 est éliminé lors de la coupure  :unsure: 

 

Pour moi, si on part de EcoR1, que l'on coupe jusqu'à la rencontre de HIND III, on se retrouve sans BamH1 ni BtsC1, or, ici c'est le cas et je ne comprend donc pas... 

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  • Solution

Salut,

 

L'ordre dans le MCS est le suivant BamHI SmaI EcoRI BtsCI HindIII.

 

La correspondance en bases est la suivante :

5' GGATCCCCCGGGGAATTCCGGATGNNAAGCTT 3'

 

On digére par EcoRI et HindIII, donc les coupures sont les suivantes : 

5' GGATCCCCCGGGGAATTCCGGATGNNAAGCTT 3'

 

Le bout souligné est celui éliminé et tu peux voir qu'il correspond à une partie de EcoRI, le site BtsCI et une partie de HindIII.

En sachant que sur le complémentaire de ce brin les coupures au niveau de EcoRI et HindIII serviront pour l'insertion donc ces sites sont conservés. 

 

J'espère que c'est un peu plus clair pour toi, n'hésite pas à redemander si ça reste flou! 

 

Bonne journée  :)

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Coucou ! :)

 

Tu as l'ordre de tes sites de restriction donné dans ton énoncé de QCM.

Tu as 5'GGATGNNNNNNNNN3' et ensuite tu positionnes les sites de restriction donnés dans les items ;)

Les enzymes couperont ensuite aux sites indiqués, tu pourras voir ou coupe FokI.

 

Est-ce plus clair ? :)

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Coucou Clémence !  :) 
 

En effet, je viens juste de remarquer que l'ordre qu'il fallait prendre était celui de l'item, j'avais pas compris l'item dans le bon sens, autant pour moi !  :rolleyes: 
 

Merci beaucoup à vous deux, j'ai tout compris maintenant !  :lol: 

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  • 2 weeks later...

Salut, 

J'ai pas compris la technique pour réussir l'exercice? 

Enfin, quand on écrit le brin avec les sites de restrictions donnés dans l'item, puis on coupe avec les deux sites de restrictions proposés, donc on se retrouve avec un fragment. Et à partir de là je ne sais pas ce qu'on cherche? Une compatibilité avec Fok1? 

Merci 

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Salut, 

J'ai pas compris la technique pour réussir l'exercice? 

Enfin, quand on écrit le brin avec les sites de restrictions donnés dans l'item, puis on coupe avec les deux sites de restrictions proposés, donc on se retrouve avec un fragment. Et à partir de là je ne sais pas ce qu'on cherche? Une compatibilité avec Fok1? 

Merci 

En fait j'ai finalement trouvé! 

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  • 1 year later...

Salut Amandie3695 ! ?

Je vais essayer de t'expliquer mais je ne garantis pas du tout mes talents d'explication ? n'hésites surtout pas à redemander si tu comprends pas quelque chose

 

Alors, tu as FokI qui a pour site de restriction :

5' - GGATG(N)9 ...

3' - CCTAC(N)13 ... 

Il coupe donc 9 bases après le "GGATG" sur le brin sens et 13 bases après "CCTAC" sur le brin non sens.

Or, on peut remarquer que ce site de restriction se retrouve sur celui de BtsCI, donc pour que FokI puisse couper, il faut qu'il y ait ce site de restriction de BtsCI présent. On sait aussi qu'après insertion de ton clone par les deux enzymes proposées, FokI ne doit pas couper dans le plasmide mais dans ce clone.

 

Donc en clair, petite méthode :

  1. Tu regardes par qui tu coupes pour insérer ton clone (à l'item C : EcoRI - HindIII)
  2. Tu prends tes enzymes dans l'ordre dans lequel elles te sont proposées et tu coupes entre tes deux enzymes pour y mettre ton clone
     
    Ici on a : BamHI - SmaI - EcoRI - BtsCI - HindIII   puis on coupe et on met le clone, ce qui nous donne : BamHI - SmaI - EcoRI - CLONE - HindIII
  3. Tu vérifies que FokI puisse bien couper dans le clone. Pour ça il faut remplir des conditions : 
  • il doit y avoir le site de restriction BtsCI présent
  • le site ne doit pas être trop éloigné de manière à ce que, quand FokI coupe (après 9 et 13 bases), cette coupure soit situé dans le clone et non dans le plasmide.
    En gros s'il n'y a qu'une enzyme qui sépare BtsCI et le clone t'auras : "GGATGNN - bases qui restent après coupure de ton enzyme (donc moins de 9 bases)  -  CLONE" sur le brin sens (de même sur le brin non sens). Du coup FokI pourra couper dans le clone mais plusieurs enzymes l'obligera à couper dans le plasmide et c'est pas ce qu'on veut

Conclusion pour l'item C : lorsqu'on a coupé avec EcoRI et HindIII on a perdu BstCI qui nous est indispensable pour mettre en action FokI : l'item est faux par perte du site de restriction.

 

J'espère t'avoir un peu éclairée sur le sujet, n'hésites pas si une chose n'est pas claire ? 

Et puis bon courage ?

 

Edited by Larousse
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Bonjour, je relance le sujet parce que moi je comprends pas pourquoi la D est fausse... J'ai bien compris les autres mais là même si le site Fok1 est situé entre les sites de clonage HindIII et BamH1 il coupe dans le fragment de cloné non ?

Merci de votre aide !! ^^

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Coucou @Leïlaa  ? 

A chaque fois que tu coupes par deux enzymes, tu perds tout ce qu'il y a eu milieu. Ici tu as : HindIII - BtsCI - SmaI - EcoRI - BamHI 

Quand tu coupes par HindIII et BamHI, tu te retrouves avec : Hind III - place pour le clone - BamHI

Tu as donc perdu la séquence dont FokI a besoin impérativement pour pouvoir couper (la séquence de BtsCI), donc ton item est faux ^^ 

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  • 11 months later...

Bonjour,

quel est le fragment qu’on insert et cb de bases fait il ? 
dans la correction y’a 15 petites croix, à quoi correspondent elles? Merci beaucoup  

Pour le reste j’ai bien compris

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