Szyln Posted December 24, 2017 Share Posted December 24, 2017 Salut ! C'est en faisant le QCM 5 du concours de l'année 2016 que je me suis rendue compte que j'ai un petit truc qui n'est pas clair, afin d'éclaircir le doute je préfère poser la question On me dit que j'ai un plasmide contenant un MCS avec les sites de restriction pour les enzymes : HindIII, KpnI, BamHI, EcoRI, NotI, XhoI, XbaI.J'ai un ADNc amplifié par PCR grâce à deux oligodésoxynucléotides a et b contenant respectivement les sites de restriction HindIII et XbaI ne s'hybridant pas avec l'ADNc.Rq : l'ADNc ne contient pas de sites HindIII ou XbaI. C : Le plasmide recombinant sera linéarisé après digestion par l'enzyme KpnI.C'est faux, et c'est là que j'ai un doute, c'est bien parce que du coup comme on a intégré l'ADNc avec les sites HindIII et XbaI, on n'a plus les sites de restriction contenus avant dans le MCS qui sont entre les deux ? Ca prend bien la place de tout ce site ? (je sais pas si ma question est claire ) D : L'ADNc inséré dans le plasmide peut être libéré avec les enzymes HindIII et NotI. J'avais bien mis faux mais seulement parce que l'ADNc ne contient pas le site NotI (enfin rien n'est précisé là-dessus dans l'énoncé), du coup je me suis dit que ça couperait dedans, sauf que je ne sais pas si c'est la bonne/seule raison. En fait en génome parfois ça me paraît un peu intuitif mais je comprends pas forcément le bon raisonnement donc c'est un peu embêtant... Merci d'avance à ceux qui pourront éclaircir tout ça! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Ouistiti Posted December 24, 2017 Solution Share Posted December 24, 2017 Coucou! C - oui c'est ça, tu enlèves tout ce qu'il y a entre tes 2 sites de restriction et tu y intègres ton ADNc donc KpnI disparait D- tu pourras couper par HindIII mais pas par NotI, effectivement parce que l'ADNc ne contient pas NotI (sinon le prof l'aurait précisé) mais également car le site NotI présent initialement sur le plasmide a été éliminé lorsque tu as inséré ton ADNc (pense à le vérifier, si jamais NotI avait été après le site Xbal, tu aurais pu libérer ton ADNc avec HindIII et NotI) J'espère que ces réponses t'aideront, et n'hésite pas à demander des précisions ! Effectivement en génome, le plus important c'est de comprendre ! Bon courage pour ces révisions Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
Szyln Posted December 24, 2017 Author Share Posted December 24, 2017 Coucou! C - oui c'est ça, tu enlèves tout ce qu'il y a entre tes 2 sites de restriction et tu y intègres ton ADNc donc KpnI disparait D- tu pourras couper par HindIII mais pas par NotI, effectivement parce que l'ADNc ne contient pas NotI (sinon le prof l'aurait précisé) mais également car le site NotI présent initialement sur le plasmide a été éliminé lorsque tu as inséré ton ADNc (pense à le vérifier, si jamais NotI avait été après le site Xbal, tu aurais pu libérer ton ADNc avec HindIII et NotI) J'espère que ces réponses t'aideront, et n'hésite pas à demander des précisions ! Effectivement en génome, le plus important c'est de comprendre ! Bon courage pour ces révisions Ah d'accord parfait, je préfère être sûre du raisonnement effectivement !! Pour la D il me semblait bien qu'il me manquait quelque chose Merci beaucoup ! Quote Link to comment Share on other sites More sharing options...
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