Isocitrate31 Posted December 9, 2017 Share Posted December 9, 2017 Bonjour, j'arrive pas a comprendre en quoi le test de Sanger et le Northern Blot nous renseignait sur la présence de la mutation au nv d'un site d'épissage... Plus précisément j'arrive pas a savoir pourquoi le patient au test Northern Blot a moins de pb de que le sain ( ce serait du à un intron plus gros à cause de la mutation?) Merci si qqn m'aide! Link to comment Share on other sites More sharing options...
Membre d'Honneur Solution Sahra Posted December 9, 2017 Membre d'Honneur Solution Share Posted December 9, 2017 Salut Isocitrate31! Grâce au séquençage Sanger tu observes une délétion d'une guanine: tu passes de "XXTTAGTAXX" à "XXTTATAXXX". Tu as vu en cours qu'il y a des sites d'épissage : GT (site donneur) et AG (site accepteur). Si tu as une mutation sur un de ces sites, il risque d'avoir des soucis d'épissage. Et ça c'est ce que tu peux voir en faisant un Northern Blot (donc sur les ARNm pour bien voir l'éventuelle différence d'épissage), et ici tu observes que l'ARNm du sain est bien plus long que celui du malade, donc probablement qu'il manque des exons au malade. Un AG muté + une différence de longueur des ARNm révélée par Northern, ça te laisse supposer que cet AG qui est muté chez le malade est sûrement un site accepteur d'épissage. Si le AG est muté, le lasso ne se fera pas à ce niveau là, et peut-être se fera-t-il avec le prochain AG, ce qui épissera l'exon suivant l'AG défectueux. C'est ce que te confirme l'analyse par RT-PCR au qcm 3, c'est l'exon 2 qui est épissé à tort. Est-ce que c'est un peu plus clair? Link to comment Share on other sites More sharing options...
Isocitrate31 Posted December 9, 2017 Author Share Posted December 9, 2017 Merci bcq!! c'est carrément plus clair Link to comment Share on other sites More sharing options...
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