Blop Posted November 18, 2017 Share Posted November 18, 2017 Bonjour! Faut il dénaturer l'ADN chromosomique pour réaliser un FISH? Ce n'est pas dit dans le cours de Bettina mais il me semble qu'une annale disait le contraire (je serais incapable de dire où j'ai vu ça ) Ensuite dans le TD5 2016/2017, question 20 item A "Concernant la technique de FISH" A. Une sonde nucléotidique peut être marquée avec un agent intercalant fluorescent --> Pris faux et je ne comprends pas pourquoi. Est ce psq ça n'a pas de rapport avec l'énoncé? Merci d'avance! Link to comment Share on other sites More sharing options...
ncm Posted November 18, 2017 Share Posted November 18, 2017 salut! pour fish j'ai bien noté qu'il y a une denaturation (pas de denaturation -> pas d'hybridation) pour les agents intercalents j'avais vu un QCM qui disait que c'etait faux car quand tu vas mettre l'agent intercalant dans le milieu il va marquer tout l'ADN et pas que l'amorce donc tu ne pourra plus detecter l'amorce. mais a verifier avec un tuteur Link to comment Share on other sites More sharing options...
Paul0 Posted November 18, 2017 Share Posted November 18, 2017 Salut, Alors pour la technique FISH, il y a un ADN cible dénaturé (donc si la cible est un ADN chromosomique il est dénaturé) qui est hybridé avec une sonde dénaturé et marquée auparavant avec un agent qui sera détectable par immunofluorescence. L'agent n'est donc pas fluorescent mais il va être reconnu par un anti-corps auquel on aura fixer une particule fluo. J'espère que je suis assez clair Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution omaynard Posted November 18, 2017 Solution Share Posted November 18, 2017 si je dis pas de bétises : - tu dénature l'ADN double brin en chauffant il devient simple brin - tu rajoute la sonde qui s'hybride un agent intercalent va s'intercaler (ouais jusque là on sait) entre les deux brins de l'ADN, entre deux bases opposées puis on peut faire un exitation à une certaine longueur d'onde pour émettre de la fluorescence or la sonde est simple brin donc pas possible d'utiliser un agent intercalent. on peut utiliser: -radiomarquage des bases (sonde chaude) -coupler aux bases des molécules fluorescentes (sonde froide) ps: on utilise les agents intercalents (comme le BET) pour la révélation (non spécifique) d'ADN après électrophorèse bonne soirée Link to comment Share on other sites More sharing options...
Blop Posted November 19, 2017 Author Share Posted November 19, 2017 D'accord merci beaucoup! Du coup j'avais noté dans mon cours (mais encore une fois c'est peut être une bêtise) que l'agent intercalant pouvait s'intégrer dans un simple brin, mais qu'il n'était détectable (donc fluorescent) que quand la molécule était double brin. Vous pouvez me le confirmer que je ne suis pas la seule à avoir noté ça? :') Link to comment Share on other sites More sharing options...
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