rbm2322a Posted December 10, 2016 Share Posted December 10, 2016 Bonjour, En regardant la dernière colle, je ne comprends toujours pas pourquoi les items A et C du qcm 24 sont faux. Je ne comprends pas non plus la correction de ces items c'est pour ca que je me permets de poser dette question sur le forum. Merci d'avance Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Gwendoline_sabat Posted December 10, 2016 Solution Share Posted December 10, 2016 Salut ! Pour le QCM 24, le but était de couper le fragment fourni dans l'énoncé de manière a ce que l'insertion d'un fragment d’intérêt se fasse en phase avec le premier ATG de la séquence (qui était donc au début pas de pièges la dessus) et dans le bon sens pour qu'une protéine de fusion soit produite. Item A : On te propose de couper le brin avec une endonucléase agissant comme suit (je n'écrirait que le brin sens) : GTGT / TTCe qui induit cette coupure : ATG CAA GTG T/TT TGT TAT GTA CCT GGG TTT TCA TAAAvec une telle coupure l'insertion du fragment d’intérêt ne se fera pas en phase et ne permettra pas la formation de la protéine de fusion. Item C : c'est le même principe sauf qu'on te propose 2 enzymes, il te faut donc procéder a plusieurs étapes préalable :- Savoir si tes enzymes sont bien incompatibles (si elles sont compatibles l'insertion risquerait de se faire dans le mauvais sens)- Savoir quelle enzyme coupe la première pour déterminer laquelle doit être en phase avec l'ATG du fragment fourni (peu importe la perte de phase avec un codon stop, il est apporté par le fragment d’intérêt). Les enzymes sont les suivantes : TT / TTC et TGT / TT la première à couper est TGT / TT car son motif apparait en premier (couleur verte). De plus ces deux enzymes sont incompatibles en effet une manière rapide de le voir est de constater que l'une est a bout 5' sortants et l'autre a bouts 3' sortants ce qui les rend constitutivement incompatibles (tu peux toujours utiliser la méthode classique tu aura le même résultat, je te l'ai mis en pièce jointe). Revenons en a notre fragment : ATG CAA GTG T/TT TGT TAT GTA CCT GGG TT/T TCA TAATu peux t'apercevoir que la première endonucléase ne permet pas d’insérer le fragment d’intérêt de façon a ce qu'il soit en phase avec l'ATG du fragment fourni (la deuxième non plus d'ailleurs mais si elle avait pu cela n'aurait rien changer). Ces 2 items sont donc bien faux. Voilà, j'espère t'avoir aidé, n'hésite pas si tu as besoin de plus de détails ! PS : J'espère que la colle t'a plu, aussi, il existe un topic dans la rubrique colle qui te permet de consulter les remarques qui ont été faites au sujet des colles ainsi que tes remarques, incompréhensions... Link to comment Share on other sites More sharing options...
rbm2322a Posted December 11, 2016 Author Share Posted December 11, 2016 Quand tu dis que le fragment d'intérêt n'est pas en phase avec l'ATG c'est parce que les deux enzymes de restriction coupent dans un codon? En tout cas merci beaucoup car c'est très clair. Je ne savais pas qu'il y avait une rubrique pour mettre ces incompréhensions au sujet des colles Link to comment Share on other sites More sharing options...
Gwendoline_sabat Posted December 11, 2016 Share Posted December 11, 2016 C'est exactement ça, tu as bien compris ! Link to comment Share on other sites More sharing options...
rbm2322a Posted December 11, 2016 Author Share Posted December 11, 2016 Merci beaucoup!!! Link to comment Share on other sites More sharing options...
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