Oberyn Posted October 2, 2016 Share Posted October 2, 2016 Salut J'ai un petit problème en ce qui concerne l'item A de ce QCM : "L'ADNc du clone isolé à été inséré dans le bon sens, permettant l'obtention de la protéine recombinante". Je ne comprends pas quelle est l'information dans l'énoncé qui nous permet de l'affirmer. J'avais noté cet item faux, car selon moi, il y avait 50% de chance qu'il s'insère dans le bon sens, donc on aurait sur le plasmide recombinant : ORI - P/O - ouverture du plasmide en coupant le site ECOR1 - insertion de l'ADNc dans le "bon" sens (ATG, STOP) Et dans 50% des cas on aurait l'ADNc inséré à l'envers, ce qui donnerait sur le plasmide : ORI - P/O - ouverture du plasmide en coupant le site ECOR1 - insertion ADNc dans le mauvais sens (STOP-ATG). Et donc dans ce cas, il serait impossible d'obtenir la protéine recombinante, car le ATG serait dans le mauvais sens et pas du tout dans le continuité du promoteur et de l'opéron lactose. En fait, j'avais compris que, qu'on allait ouvrir le plasmide avec Ecor1, et, comme l'ADNc est entouré de sites écor1, il pourrait s'insérer dans un sens ou l'autre... Mais il y a surement un truc qui m'a échappé, ou alors j'ai rien compris ^^ Je ne sais pas si je suis très clair, mais merci d'avance pour votre aide. Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution victorw Posted October 2, 2016 Solution Share Posted October 2, 2016 En effet, l'ADNc aurait pu s'insérer dans le mauvais sens mais nous n'aurions pas obtenu les tailles des fragments à la PCR (ici avec les amorces a et c la taille du fragment est inférieur qu'avec les amorces a et d). Si le codon stop avait était en premier dans la séquence (et donc l'amorce d également en premier et dans le mauvais sens) ces tailles n'auraient pu être obtenues. Donc, ces tailles ne sont plausibles qu'avec l'ADNc inséré dans le bon sens et cela permettant alors l'obtention de la protéine recombinante . Link to comment Share on other sites More sharing options...
Oberyn Posted October 4, 2016 Author Share Posted October 4, 2016 Merci pour ta réponse ! Je n'avais pas du tout pensé à ça Link to comment Share on other sites More sharing options...
victorw Posted October 5, 2016 Share Posted October 5, 2016 Avec plaisir Link to comment Share on other sites More sharing options...
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