SDS page et western blot

[mathoulematou]

Bonjour, je viens de réaliser que je n'ai pas vraiment compris la différence entre ces deux technique: sds page et western blot

Quelqu'un pourrait m'expliquer ? Merci 

[ilhamoxiciIline]

Salut,

en reprenant le poly du tat je vois pas de grosse différence si ce n'est que sds page est une technique de migration des protéines selon leur masse en conditions dénaturantes (ça c'est important) et le westerne blot c'est une technique qui utilise celle de sds page (sur le poly ils écrivent "+ transfert sur une mb de nitrocellulose")

je veux pas dire n'importe quoi en disant que c'est la même chose (faudrait qu'un tuteur/rm confirme ou infirme) mais c'est pas très différent c'est sûr

[POMME]

Salut, je confirme tous à fait ce qu’a dit @ilhamoxiciIline. Enfaite personnellement je vois le westernblot comme la combinaison du DotBlot et du SDS-Page.

 

En gros pour le western blot tu vas d’abord faire migrer tes protéine par SDS-page puis tu les transfères sur nitrocellulose pour les détécter.
 

Le DotBlot tu mets directement tes protéine sans les faires migrer sur nitrocellulose pour les détecter.

 

Le SDS-page est une technique de séparation des protéine tandis que le Western blot (le dot blot aussi) sont des technique de détection des protéines. 

[Mitose64]

Coucou @mathoulematou,

 

Alors certes ces deux techniques se ressemblent (et même ces trois techniques si on rajoute le dot-blot) mais attention @ilhamoxiciIline, elles sont quand même différentes !

 

Alors le SDS-PAGE va être une technique qui va permettre de séparer les protéines se trouvant dans une même solution : en effet on met toutes les protéines sur un gel, on fait une électrophorèse qui va donc séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaires (les moins lourdes vont le plus loin sur le gel)(d'ailleurs qui dit électrophorèse dit dénaturation des protéines). Donc avec cette technique on va pouvoir voir le nombre de protéine contenues dans un échantillon et éventuellement les différencier entre elles si elles si on connait leurs poids moléculaires (mais du coup on est pas forcément sûr à 100% vu qu'il est possible si on a un gros échantillon que plusieurs portéines fassent la même taille (je pense pas que vous aurez de piège là dessus en QCM à l'examen mais bon)).

 

Ensuite pour le Dot Blot : on met les protéines directement sur une membrane de nitrocellulose et on teste direct avec des anticorps dirigés contre la protéine d'intéret (donc sans électrophorèse ni séparation au préalable) pour savoir si notre protéine d'intéret est présente ou pas dans l'échantillon.

 

Et pour finir le Western Blot : ici on fait subir à nos protéines une électrophorèse SDS-PAGE (donc séparation des protéines en fonction de leur poids moléculaire (+dénaturation)), puis on les transfère sur une membrane de nitrocellulose (ça peut être un autre type de membrane mais peu importe) et on teste maintenant la membrane avec des anticorps spécifiques dirigés contre la protéine d'intéret.

 

Donc le SDS permet de séparer les protéines et après de les différencier mais à condition de connaitre leurs poids moléculaires, le Dot Blot de voir si les portéines sont présentes dans un milieu à l'aide d'Ac sans les séparer des autres et sans les dénaturer et le Western Blot permet de les séparer puis de les identifier avec des Ac spécifiques.

 

Voilà  j'espère que c'est plus clair pour vous ;)

 

Bonne journée !!