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Phosphatase pour éviter la recircularisation du plasmide


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Salut,

une question que je me suis posée plusieurs fois, pour eviter qu’un plasmide digéré par une seule enzyme de restriction ne se referme, on a comme méthode de traiter ce plasmide par une phosphatase comme ça plus de phosphates et donc plus d’actions de la ligase 

Mais du coup à un moment donné il faut bien insérer l’ADNc et ensuite refermer le plasmide recombinant. Comment faire pour le fermer s’il n’y a plus de phosphates ? 

 

Merci d’avance pour vos réponses !

 

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Posted (edited)

Saluuuut

 

En fait tu ouvres généralement un plasmide pour y mettre ton insert. Cet insert aura les 5' ET 3’phosphorylés donc ça ne pose pas de problèmes.

Est ce que tu as compris ou je detail? .

Edited by mouchou
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