Expérience

[Abdel_31]

Bonsoir , quelqu'un pourrait m'expliquer cette expérience svp https://ibb.co/2yrBHLM car j'y comprends rien ...

Je vois pas en quoi l'ajout de ligand libre modifierai quoi que ce soit...

[Nouk]

Salut Abdel,

Les LDL sont captées par les tissus de 2 manières : soit via des récepteurs aux LDL (qui reconnaissent l'Apo B100 et l'Apo E), soit SANS récepteur (de manière non spécifique sans liaison covalente). Cette expérience permet de visualiser le phénomène de saturation des récepteurs ainsi que l'affinité entre les LDL et leurs récepteurs.

Si on met 100 LDL marquées radioactivement pour pouvoir les repérer, on obtient 100 LDL liées à la fin de l'expérience dont environ 80 liées aux récepteurs (= specific binding) et 20 liées aux cellules de façon non spécifique. Les LDL se fixent prioritairement aux récepteurs car ils ont une grande affinité avec eux. Mais dans notre expérience, on ne voit pas la différence entre les LDL liées par des récepteurs ou de façon non spécifique, on observe tous les LDL marquées et liées (total binding). Donc on rajoute des LDL "froids" = non marqués et en excés. Ils vont se fixer en premier sur les récepteurs et vont donc "cacher" les récepteurs. Ensuite, on ajoute des LDL radiomarquées en augmentant la concentration au fur et à mesure. On visualise ainsi les LDL marquées et liées aux cellules mais de façon non spécifique sachant que les récepteurs sont déjà saturés par des LDL non marqués.  C'est la ligne droite "non specific binding". A partir de ces deux courbes (total binding et nonspécific binding), tu peux obtenir la courbe de liaison spécifique aux récepteurs en faisant : "liaison totale" moins "liaison non spécifique" = "liaison spécifique". Dans cet exemple, il y aurait 80 récepteurs présents à la surface des cellules qui retiennent 80 LDL sur les 100. Une fois que l'on a obtenu la courbe "specific binding", on voit la saturation des récepteurs lorsque la courbe prend une phase stationnaire et n'augmente plus. Cela correspond à 100% de LDL liées spécifiquement aux récepteurs. On peut également lire sur la courbe, la constante Kd qui représente l'inverse de l'affinité. On lit le Kd au niveau de l’abscisse lorsque l'ordonnée est à 50% de LDL liées spécifiquement. Plus le Kd est petit, plus l'affinité est grande avec le récepteur.

 

La représentation de Scatchard à droite donne également Bmax = le nombre total théorique de sites de liaison(récepteur aux LDL) du ligand (LDL).

 

J'ai essayé d'expliquer comme j'ai pu. Repose moi des questions plus précises, si mon explication ne te parait pas trop farfelue.

Bonne soirée

[lefuturneurochir]

Il y a 1 heure, Nouk a dit :

Salut Abdel,

Les LDL sont captées par les tissus de 2 manières : soit via des récepteurs aux LDL (qui reconnaissent l'Apo B100 et l'Apo E), soit SANS récepteur (de manière non spécifique sans liaison covalente). Cette expérience permet de visualiser le phénomène de saturation des récepteurs ainsi que l'affinité entre les LDL et leurs récepteurs.

Si on met 100 LDL marquées radioactivement pour pouvoir les repérer, on obtient 100 LDL liées à la fin de l'expérience dont environ 80 liées aux récepteurs (= specific binding) et 20 liées aux cellules de façon non spécifique. Les LDL se fixent prioritairement aux récepteurs car ils ont une grande affinité avec eux. Mais dans notre expérience, on ne voit pas la différence entre les LDL liées par des récepteurs ou de façon non spécifique, on observe tous les LDL marquées et liées (total binding). Donc on rajoute des LDL "froids" = non marqués et en excés. Ils vont se fixer en premier sur les récepteurs et vont donc "cacher" les récepteurs. Ensuite, on ajoute des LDL radiomarquées en augmentant la concentration au fur et à mesure. On visualise ainsi les LDL marquées et liées aux cellules mais de façon non spécifique sachant que les récepteurs sont déjà saturés par des LDL non marqués.  C'est la ligne droite "non specific binding". A partir de ces deux courbes (total binding et nonspécific binding), tu peux obtenir la courbe de liaison spécifique aux récepteurs en faisant : "liaison totale" moins "liaison non spécifique" = "liaison spécifique". Dans cet exemple, il y aurait 80 récepteurs présents à la surface des cellules qui retiennent 80 LDL sur les 100. Une fois que l'on a obtenu la courbe "specific binding", on voit la saturation des récepteurs lorsque la courbe prend une phase stationnaire et n'augmente plus. Cela correspond à 100% de LDL liées spécifiquement aux récepteurs. On peut également lire sur la courbe, la constante Kd qui représente l'inverse de l'affinité. On lit le Kd au niveau de l’abscisse lorsque l'ordonnée est à 50% de LDL liées spécifiquement. Plus le Kd est petit, plus l'affinité est grande avec le récepteur.

 

La représentation de Scatchard à droite donne également Bmax = le nombre total théorique de sites de liaison(récepteur aux LDL) du ligand (LDL).

 

J'ai essayé d'expliquer comme j'ai pu. Repose moi des questions plus précises, si mon explication ne te parait pas trop farfelue.

Bonne soirée

on lel it où le Bmax?

[Nouk]

En abscisse là où la droite croise l'abscisse sur la représentation de scatchard.

[Abdel_31]

Il y a 22 heures, Nouk a dit :

Salut Abdel,

Les LDL sont captées par les tissus de 2 manières : soit via des récepteurs aux LDL (qui reconnaissent l'Apo B100 et l'Apo E), soit SANS récepteur (de manière non spécifique sans liaison covalente). Cette expérience permet de visualiser le phénomène de saturation des récepteurs ainsi que l'affinité entre les LDL et leurs récepteurs.

Si on met 100 LDL marquées radioactivement pour pouvoir les repérer, on obtient 100 LDL liées à la fin de l'expérience dont environ 80 liées aux récepteurs (= specific binding) et 20 liées aux cellules de façon non spécifique. Les LDL se fixent prioritairement aux récepteurs car ils ont une grande affinité avec eux. Mais dans notre expérience, on ne voit pas la différence entre les LDL liées par des récepteurs ou de façon non spécifique, on observe tous les LDL marquées et liées (total binding). Donc on rajoute des LDL "froids" = non marqués et en excés. Ils vont se fixer en premier sur les récepteurs et vont donc "cacher" les récepteurs. Ensuite, on ajoute des LDL radiomarquées en augmentant la concentration au fur et à mesure. On visualise ainsi les LDL marquées et liées aux cellules mais de façon non spécifique sachant que les récepteurs sont déjà saturés par des LDL non marqués.  C'est la ligne droite "non specific binding". A partir de ces deux courbes (total binding et nonspécific binding), tu peux obtenir la courbe de liaison spécifique aux récepteurs en faisant : "liaison totale" moins "liaison non spécifique" = "liaison spécifique". Dans cet exemple, il y aurait 80 récepteurs présents à la surface des cellules qui retiennent 80 LDL sur les 100. Une fois que l'on a obtenu la courbe "specific binding", on voit la saturation des récepteurs lorsque la courbe prend une phase stationnaire et n'augmente plus. Cela correspond à 100% de LDL liées spécifiquement aux récepteurs. On peut également lire sur la courbe, la constante Kd qui représente l'inverse de l'affinité. On lit le Kd au niveau de l’abscisse lorsque l'ordonnée est à 50% de LDL liées spécifiquement. Plus le Kd est petit, plus l'affinité est grande avec le récepteur.

 

La représentation de Scatchard à droite donne également Bmax = le nombre total théorique de sites de liaison(récepteur aux LDL) du ligand (LDL).

 

J'ai essayé d'expliquer comme j'ai pu. Repose moi des questions plus précises, si mon explication ne te parait pas trop farfelue.

Bonne soirée

Ok parfait c'est très clair 

Merci!