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  • Tuteur
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Hello,

 

 

Il y a quelques items que je n'ai pas compris, quelqu'un pourrait m'aider svp ?

 

Ici c'est le 2C qui me pose problème (Vrai)

 

mx8d.png

 

Ici le 6E (Vrai)

 

4ro1.png

 

et là le 12 E (Vrai)

(je suis pas sûre d'avoir bien compris les graphiques)
 

ma5o.png

 

Merci beaucoup

  • Solution
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Heey @MensSanaCorporeSano ! 

 

Pour l'item 2C : Les cellules doivent bien contenir 2 cadres de lecture eucaryotes  (puisqu'on est dans des cellules humaines). Un cadre de lecture pour la protéine RhoB et un cadre de lecture pour la GFP (qui permet ici de vérifier que les cellules ont bien intégré le plasmide via la fluorescence).

 

Pour l'item 6E : une chromatographie d'exclusion permet de séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire. Or si on utilise un milieu non dénaturant (pour conserver les formes dimères) on pourra séparer les monomères et les dimères qui sont 2 fois plus lourds.

 

Pour l'item 12E : Alors ces graphiques montrent les résultats de cytométries en flux et l'énoncé te précise que la fluorescence permet de quantifier le nombre de cellules mortes. Les cellules mortes sont donc celles qui sont dans la fenêtre M1 (positives à la fluorescence).

Il va falloir comparer les graphiques de droite (présence de FasL) et de gauche (absence de FasL) pour comprendre le rôle de FasL dans la mort des cellules :

 

D'abord on regarde la situation contrôle

- En absence de FasL : peu de cellules mortes (10)

- En présence de FasL : peu de cellules mortes (17)

-> Mini conclusion : si FasL est présent tout seul, ça change pas grand chose au nombre de cellules mortes. Donc les cellules sont insensibles à FasL seul.

 

Ensuite on peut regarder la situation où les cellules expriment la caspase 10 :

- En absence de FasL : nombre moyen de cellules mortes (42)

- En présence de FasL : beaucoup de cellules mortes (92)

-> Mini conclusion : le nombre de cellules mortes augmente en présence de caspases 10 associées au FasL (si ya que les caspase 10, le nombre de cellules mortes n'est pas maximal).

 

Si on recoupe toutes ces données, on a ça : 

Quand ya que FasL -> cellules insensibles

Quand ya que les caspases 10 -> le nombre de cellules mortes est moyen

Quand ya FasL + les caspases 10 -> le nombre de cellules mortes est très élevée -> ça ne peut pas être dû qu'à l'action des caspases 10 (comme dit juste au dessus). C'est donc que FasL joue aussi dans ces conditions (présence des caspases 10) -> Donc conclusion finale : Les caspases 10 restaurent la sensibilité des cellules déficientes à FasL. 

 

J'espère que c'est plus clair. (surtout pour l'item 12E, sinon n'hésite pas à demander des précisions)

La tutobise 🧡

 

 

Posted

Salut @MensSanaCorporeSano☀️

 

  • Pour l'item 2C : Le vecteur viral AdRhoB a été modifié dans le but d'exprimer à la fois 2 protéines : la protéine RhoB et la protéine fluorescente GFP qui correspondent chacune à 2 cadres de lecture ouverts distincts : un pour la protéine RhoB et un autre pour la protéine GFP.  Donc pour exprimer ces 2 protéines, il faut au moins 2 cadres de lecture ouverts distincts dans la construction génique du vecteur.

 

  • Pour l'item 6E : Pour rappel, la chromatographie d'exclusion est une technique de purification qui sépare les protéines en fonction de leur taille et de leur forme. Dans cette méthode, les petites molécules pénètrent dans les pores du gel de la colonne, tandis que les plus grandes sont exclues et passent rapidement à travers la colonne, ce qui entraîne leur sortie plus tôt. Si le lysozyme monomérique est plus petit en taille par rapport au dimère, il traversera la colonne de gel d'exclusion plus lentement que le dimère, car il pénètre mieux dans les pores du gel. Par conséquent, en utilisant la chromatographie d'exclusion, les chercheurs peuvent séparer les différentes formes du lysozyme et isoler la forme monomérique.

 

  • Pour l'item 12E : Tu vois à l'aide des graphiques que lorsque les cellules sont déficientes en caspase 8, le nombre de cellule est important en présence de FasL qui est un facteur de nécrose tumorale alors que lorsque les cellules déficientes en caspace 8 qui ont été transfectées avec un ADNc codant pour la caspace 10, leur nombre est diminué en présence de FasL ce qui indique que ce facteur a un effet sur ces cellules. L'expression de la caspase 10 restaure donc bien la sensibilité à FasL.
  • Tuteur
Posted

Salut,

 

Merci pour vos réponses (hyper rapide en plus!)

 

  On 2/21/2024 at 8:46 PM, Dattebayo said:
  • Donc pour exprimer ces 2 protéines, il faut au moins 2 cadres de lecture ouverts distincts dans la construction génique du vecteur.

 

Expand  

Donc on peut en faire une généralité  ? "1 protéine = 1 cadre de lecture  (minimum)"

 

 

  On 2/21/2024 at 8:40 PM, Vector said:

Pour l'item 6E : une chromatographie d'exclusion permet de séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire. Or si on utilise un milieu non dénaturant (pour conserver les formes dimères) on pourra séparer les monomères et les dimères qui sont 2 fois plus lourds.

Expand  

Ah oui, j'avais mal compris l'item, merci bcp :)

 

  On 2/21/2024 at 8:40 PM, Vector said:

'abord on regarde la situation contrôle

- En absence de FasL : peu de cellules mortes (10)

- En présence de FasL : peu de cellules mortes (17)

-> Mini conclusion : si FasL est présent tout seul, ça change pas grand chose au nombre de cellules mortes. Donc les cellules sont insensibles à FasL seul.

 

Ensuite on peut regarder la situation où les cellules expriment la caspase 10 :

- En absence de FasL : nombre moyen de cellules mortes (42)

- En présence de FasL : beaucoup de cellules mortes (92)

-> Mini conclusion : le nombre de cellules mortes augmente en présence de caspases 10 associées au FasL (si ya que les caspase 10, le nombre de cellules mortes n'est pas maximal).

 

Si on recoupe toutes ces données, on a ça : 

Quand ya que FasL -> cellules insensibles

Quand ya que les caspases 10 -> le nombre de cellules mortes est moyen

Quand ya FasL + les caspases 10 -> le nombre de cellules mortes est très élevée -> ça ne peut pas être dû qu'à l'action des caspases 10 (comme dit juste au dessus). C'est donc que FasL joue aussi dans ces conditions (présence des caspases 10) -> Donc conclusion finale : Les caspases 10 restaurent la sensibilité des cellules déficientes à FasL. 

Expand  

ça parait si simple maintenant 😭 

 

Merci beaucoup pour vos explications, elles sont super, j'ai tout compris  !! :D

  • 2 weeks later...

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