dot blot et western blot

[capasspasut3]

Bonjour,

Est ce que quelqu'un peut m'expliquer la différence entre le western blot et le dot blot parce que je n'ai pas bien compris la différence entre ces  2 techniques .

 

[flo7]

Salut ! 

Alors en faite pour la Western Blot tu vas faire une SDS-PAGE PUIS tu transfères ta protéine sur un filtre et tu la détectes avec une méthode de marquage indirect (Ac non marqué qui sera dirigé contre la protéine puis un Ac marqué dirigé contre le fragment fc du premier Ac) 

Alors que dans la dot Blot, on ne fait pas de SDS PAGE au préalable, on dépose directement la protéine sur le filtre puis on la détecte à l'aide d'un marquage indirect ici aussi.  (+ dans le cas de la dot Blot on n'a pas de notion de PM (puisqu'on ne fait pas de SDS PAGE avant)) 

 

C'est plus clair ? 

[Mitose64]

Coucou @mel326,

 

Je confirme ce que dit @flo7 ! Dans un Western Blot on fait une électrophorèse SDS-PAGE puis on transfère sur une membrane. Ensuite on incube avec des anticorps qui sont ensuite révélés par radioactvité ou marquage (c'est là ou je suis pas d'accord avec @flo7, ici le marquage est direct (ou en tout cas il est préférentiellement direct et j'imagine qu'on peut aussi faire un indirect) il me semble, on utilise un anticorps déjà marqué qui sera directement dirigé contre la protéine d'intérêt).

Pour le DOT-BLOT, la différence est qu'on ne sépare pas les protéines par électrophorèse avant, on dépose direct les protéines sur le filtre et on les met en contact avec les anticorps.

Une autre différence entre les deux techniques est que le Western Blot est une technique semi-quantitative (c'est à dire que l'intensité du signal varie en fonction de la quantité de protéine) tant dis que le DOT-BLOT est une technique qualitative, elle permet seulement d'indiquer si la protéine est présente ou pas, pas sa quantité.

 

Voilà, j'espère que cela répond à ta question !

 

Bonne fin de journée !

[flo7]

Il y a 1 heure, Mitose64 a dit :

(c'est là ou je suis pas d'accord avec @flo7, ici le marquage est direct (ou en tout cas il est préférentiellement direct et j'imagine qu'on peut aussi faire un indirect) il me semble, on utilise un anticorps déjà marqué qui sera directement dirigé contre la protéine d'intérêt).

salut @Mitose64,  personnellement dans mon cours il est bien précisé qu'on utilise 2 Ac, un qui vient se fixer sur la protéine puis un autre qui est marqué

[Mitose64]

il y a 1 minute, flo7 a dit :

salut @Mitose64,  personnellement dans mon cours il est bien précisé qu'on utilise 2 Ac, un qui vient se fixer sur la protéine puis un autre qui est marqué

Okay alors autant pour moi ! Si la prof a dit ça retenez ça !