Techniques d’étude des prot: IP et Pull down

[Ana_stomose]

Salut !!

Je n’ai absolument pas compris le principe de fonctionnnement de ces deux techniques : immuno precipitation et Pull down pour mettre en evidence les partenaires protéiques, est ce que quelqu’un pourrait m’expliquer ? Car les schema que la prof a balayé en 2min je ne les comprends pas DUTOUT ( celui où on étudie l’interaction MDM2/ Vif et celui avec MMSET/BRCT… )

Merci ÉNORMÉMENT d’avance !!!

[Cicatrix]

salut

déjà est ce que tu as regardé ce qu'elle a mis sur moodle ? ça s'appelle "ILM IP et GST pull down sonorisé"

 

[Mitose64]

Coucou @Ana_stomose,

Je vais essayer de t'expliquer tout ça le plus clairement possible ! (néanmoins tu peux peut-être aussi essayer d'écouter le cours que la prof a mis sur moodle si tu ne l'as pas déjà fait comme te le recommande @Cicatrix).

Déjà il faut savoir que le point commun de ces deux techniques est qu'elles permettent d'extraire et d'isoler une protéine d'intérêt que l'on veut analyser. Pour cela on a donc deux techniques possibles : l'immunoprécipitation et le pull-down.

 

En Immunoprécipitation: On met dans notre extrait cellulaire des anticorps qui vont reconnaître spécifiquement notre protéine d'intérêt et qui vont donc se lier à elle. Ensuite on rajoute dans le même extrait des grosses billes (je sais plus exactement la matière et peu importe mais il faut surtout noter qu'elles sont lourdes) qui vont se lier spécifiquement aux anticorps que l'on a ajouté précédemment. Donc cela signifie que maintenant on a un gros complexe qui s'est formé: le complexe bille + Anticorps (un ou plusieurs) + protéine d'intérêt (+éventuelles autres protéines avec lesquelles notre protéine d'intéret pourrait réagir). Maintenant on centrifuge l'extrait protéique ce qui permet de récupérer au fond du tube, dans le culot, le complexe qui a "coulé" au fond à cause du poids des billes.

On a donc maintenant récupérer la protéine d'intérêt qui est toujours liée aux anticorps et à ses éventuelles protéines d'interaction et on peut analyser le tout par électrophorèse SDS-PAGE et Western-Blot.

 

Pour le Pull Down: Ici on utilise pas d'anticorps, seulement des billes qui sont liés à un appât donc c'est à dire à un élément par lequel la protéine d'intéret a une affinité spécifique et auquel elle va se lier. Là encore on obtient un complexe: le complexe Bille-Appât + protéine d'intéret (+éventuelles protéines avec lesquelles elle interagit). Maintenant comme avec l'IP, on centrifuge l'extrait et on récupère dans le culot le complexe avec donc notre protéine d'intérêt et on peut analyser le tout avec une électrophorèse SDS-PAGE et un Western Blot.

 

Voilà j'espère que c'est plus clair pour toi ! N'hésite pas à le dire si tu as d'autres questions !!

 

Bonne fin de journée ;)

Edited February 10, 2024 by Mitose64

[Ana_stomose]

Re ! Merci beaucoup à vous ! 

@Cicatrix, en effet j’avais visionner le diapo sur Moodle mais c’était toujours pas clair justement.

@Mitose64, merci beaucoup tu gères  !!