Cassette d’insertion Complète ?

[Von]

Bonjour,

je voudrai savoir si lorsqu’on insert une cassettes d’expression dans un plasmide pour faire un recombinant, il faut obligatoirement que l’insert contienne son Promoteur + gène +  son terminateur.

 

Parce à la colle 2 de cette année on coupé le gène d’intérêt mais en ne gardant que la partie codant et le promoteur était ensuite un promoteur qui était déjà sur le plasmide. (QCM4E)

Et sur le poly de cette année il y a un QCM (3E) ou ils disent que si l’insert est coupé sans son terminateur alors cela ne fonctionnera pas.

 

Donc pour que tout fonctionne il faut que le gène d’intérêt garde son promoteur et son terminateur ou pas forcément ?

[Mitose64]

Coucou,

Alors pour que cela fonctionne tu dois pas forcément tout prendre pour faire ton plasmide recombiant. Je m'explique: En gros ton insert doit absoluement contenir la partie codante (l'ADNc le plus souvent) de ton gène (logique j'ai envie de dire). Ensuite le reste, donc à savoir le promoteur et le terminateur, ça dépend. En effet si dans le plasmide dans lequel tu veux transférer ton gène, il y a rien du tout, tu dois apporter le promoteur et le terminateur pour que cela fonctionne. À l'inverse, si tu as dans le plasmide "d'arrivée" un promoteur adapté (dans le sens procaryote ou eucaryote en fonction de la portréine que tu veux produire derrière) qui sera proche et dans le sens de ton insert ainsi qu'un terminateur, là tu peux simplement uniquement transférer l'ADNc.

Conclusion, ton insert doit contenir les éléments nécéssaires manquant pour exprimer ton gène d'intéret (donc si il n'y a pas de promoteur tu dois l'apporter, si c'est le terminateur qu'il n'y a pas tu dois l'apporter...)

Donc par exemple dans le QCM4E de la colle 2, on trouve déjà le promoteur eucaryote ainsi que le terminateur --> pas besoin de les apporter en plus (néanmoins si les sites des enymes de restrictions "t'obligent" à apporter un terminateur en plus c'est pas un problème ;) )

 

Est ce que cela répond à ta question ?

 

Bonne soirée !!

[Von]

il y a 10 minutes, Mitose64 a dit :

Coucou,

Alors pour que cela fonctionne tu dois pas forcément tout prendre pour faire ton plasmide recombiant. Je m'explique: En gros ton insert doit absoluement contenir la partie codante (l'ADNc le plus souvent) de ton gène (logique j'ai envie de dire). Ensuite le reste, donc à savoir le promoteur et le terminateur, ça dépend. En effet si dans le plasmide dans lequel tu veux transférer ton gène, il y a rien du tout, tu dois apporter le promoteur et le terminateur pour que cela fonctionne. À l'inverse, si tu as dans le plasmide "d'arrivée" un promoteur adapté (dans le sens procaryote ou eucaryote en fonction de la portréine que tu veux produire derrière) qui sera proche et dans le sens de ton insert ainsi qu'un terminateur, là tu peux simplement uniquement transférer l'ADNc.

Conclusion, ton insert doit contenir les éléments nécéssaires manquant pour exprimer ton gène d'intéret (donc si il n'y a pas de promoteur tu dois l'apporter, si c'est le terminateur qu'il n'y a pas tu dois l'apporter...)

Donc par exemple dans le QCM4E de la colle 2, on trouve déjà le promoteur eucaryote ainsi que le terminateur --> pas besoin de les apporter en plus (néanmoins si les sites des enymes de restrictions "t'obligent" à apporter un terminateur en plus c'est pas un problème ;) )

 

Est ce que cela répond à ta question ?

 

Bonne soirée !!

Ok c’est bien plus clair merci beaucoup vraiment