coupure plasmide et séquencage

[mathoulematou]

Bonjour, je  ne comprends pas item C de ce qcm : https://ibb.co/nksZ4Fc

Il est compté vrai: mais hind et eco coupe au milieu d'un gène deja présent, donc si on intègre le gène d'intérêt, il y a possibilité de décalage de lecture, ou obtention d'une protéine modifier par les séquence du gène deja présent non ? 

 

Pareil je ne comprends pas cet item : Lors du séquençage selon Sanger, les fragments obtenus dans les 4 tubes sont dénaturés, mélangés puis séparés sur un gel d'électrophorèse. Vrai mais ils ne sont pas mélangés, on fait l'électrophorèse sur 4 pistes différentes ? 

 

Encore une question :sur ce qcm https://ibb.co/DrKvV7c  item C est compté faux car il y a aura 4 fragments, mais je me demandais si on nous donné les 4 bons fragments ( de la correction : C. Le vecteur digéré par HindIII libère 4 fragments un de 110 pb, un de 320 pb, un de 1770 pb et un de 3800), on peut quand meme dire faux car il est a 2 possibilité de tailles de fragment en fonction du sens d'insertion ?  

 

Merci 

Edited January 21, 2024 by mathoulematou

[juanito]

Hey!!!!! Je vais essayer de répondre à tes questions dans l'ordre. Mais ça serait pas mal qu'un tuteur vérifie tout.

il y a 18 minutes, mathoulematou a dit :

Pareil je ne comprends pas cet item : Lors du séquençage selon Sanger, les fragments obtenus dans les 4 tubes sont dénaturés, mélangés puis séparés sur un gel d'électrophorèse. Vrai mais ils ne sont pas mélangés, on fait l'électrophorèse sur 4 pistes différentes ? 

En fait je pense que les deux sont possibles. Il est possible de faire une électrophorèse avec une piste pour chaque base azotée. Mais c'est aussi possible de les mélanger à condition qu'une couleur de fluorescence soit associée pour chaque base. La lecture sera d'autant plus simple et rapide.

PS: En P2 j'ai fait une fiche récapitulant les techniques que l'on a vu. Si ça t'intéresse, je peux te montrer la partie sur Sanger.

il y a 30 minutes, mathoulematou a dit :

Il est compté vrai: mais hind et eco coupe au milieu d'un gène deja présent, donc si on intègre le gène d'intérêt, il y a possibilité de décalage de lecture, ou obtention d'une protéine modifier par les séquence du gène deja présent non ? 

Je suis d'accord avec toi. Si l'on coupe au milieu du gène, il est tout à fait possible qu'il y ait un décalage de lecture. Maintenant, est-ce vraiment un gène??? J'aimerais l'avis de quelqu'un d'autres avant de te donner une réponse. Parce que sur le schéma, il n'y a pas de légende. 

Je t'avoue que celui ci m'a l'air ambigu. Je sèche dessus dsl. Mais ton raisonnement est vrai.

 

il y a 37 minutes, mathoulematou a dit :

Encore une question :sur ce qcm https://ibb.co/DrKvV7c  item C est compté faux car il y a aura 4 fragments, mais je me demandais si on nous donné les 4 bons fragments ( de la correction : C. Le vecteur digéré par HindIII libère 4 fragments un de 110 pb, un de 320 pb, un de 1770 pb et un de 3800), on peut quand meme dire faux car il est a 2 possibilité de tailles de fragment en fonction du sens d'insertion ? 

Ensuite, on a un clonage non orienté. Donc en effet, le promoteur tissus spécifique peut s'insérer dans les 2 sens. Donc la taille des fragments sera différente. C'est bien vu car cela nous permet directement de dire que c'est faux.

PS : C'est d'autant plus faux qu'il y a 4 sites de restrictions donc 4 fragments. Mais ça tu l'as déjà vu c'est bien joué!!!!!

[Lulu_le_Fou]

Re @mathoulematou !

 

Il y a 3 heures, mathoulematou a dit :

Il est compté vrai: mais hind et eco coupe au milieu d'un gène deja présent, donc si on intègre le gène d'intérêt, il y a possibilité de décalage de lecture, ou obtention d'une protéine modifier par les séquence du gène deja présent non ? 

 

Je suis d'accord avec @juanito (merciii) il y a un problème, c'est un errata à mon avis, où tu l'as trouvé ?

 

Il y a 3 heures, mathoulematou a dit :

Pareil je ne comprends pas cet item : Lors du séquençage selon Sanger, les fragments obtenus dans les 4 tubes sont dénaturés, mélangés puis séparés sur un gel d'électrophorèse. Vrai mais ils ne sont pas mélangés, on fait l'électrophorèse sur 4 pistes différentes ? 

C'est vrai que c'est un peu dit l'item et mal formulé, ne t'y attarde pas à mon avis c'est trop ambigue...

 

Il y a 3 heures, mathoulematou a dit :

Encore une question :sur ce qcm https://ibb.co/DrKvV7c  item C est compté faux car il y a aura 4 fragments, mais je me demandais si on nous donné les 4 bons fragments ( de la correction : C. Le vecteur digéré par HindIII libère 4 fragments un de 110 pb, un de 320 pb, un de 1770 pb et un de 3800), on peut quand meme dire faux car il est a 2 possibilité de tailles de fragment en fonction du sens d'insertion ? 

oui il y a 4 fragments qui dépendent du sens d'insertion du promoteur, donc ce qui y'a écrit dans la correction n'est pas toujours vrai et donc faux oui,

si c'est dans le bon sens  on aura : 

110, 310, 1780, et le dernier (6000 - 110 - 310 - 170) (flemme de faire le calcul)

Si c'est dans le mauvais sens : 

310, 580, 1310 et dernier (6000 - 310 - 580 - 1310)

 

Voilàà est ce que ça répond à tes questions ?