emmaladie Posted January 15, 2024 Posted January 15, 2024 Bonjour, je ne suis pas sur d'avoir tout compris par rapport à cette partie du cours peut on me dire si j'ai bien compris? En partant d'organne/tissu ou cellule en culture par ex on fait un tampon de lyse et on obtient un homogénat et au fond les cellules lysées=> c'est donc l'extrait brut. Ensuite, on procède a une centrifugation pour séparer tout ça et obtenir un lysat (donc que notre protéine d'intérêt soit accessible) ? Je me confond un peut tout donc je voulais etre sure! Merciiii Quote
Solution Paul.f Posted January 15, 2024 Solution Posted January 15, 2024 Bonjour ! Tu as compris l'idée ! Cette partie du cours peut être un peu confuse donc je vais réexpliquer ici cette méthode d'extraction pour être certain que tout soit bien compris. Lorsque tu pars d'un organe/tissu ou cellule, les protéines ne sont pas directement purifiable car non solubles, d'où la nécessité de les extraire. On utilise dans un premier temps un tampon de lyse associé à d'autres méthodes de lyse pour obtenir un meilleur résultat (lyse chimique, enzymatique, chimique, mécanique...). A ce stade, on obtient un homogénat. On réalise alors une centrifugation de l'homogénat pour séparer la fraction soluble, formant alors l'extrait brut, de la fraction insoluble. On obtient donc un surnageant correspondant à l'extrait brut dans lequel se trouve les protéines solubilisées et un culot contenant les débris/membranes cellulaires. On utilisera l'extrait brut pour la purification. J'espère que c'est plus clair pour toi, si tu as d'autres questions, n'hésite pas ! bon courage ! C_trist, Lulu_le_Fou and tibomajordepromo 1 2 Quote
emmaladie Posted January 15, 2024 Author Posted January 15, 2024 il y a 15 minutes, Paul.f a dit : Bonjour ! Tu as compris l'idée ! Cette partie du cours peut être un peu confuse donc je vais réexpliquer ici cette méthode d'extraction pour être certain que tout soit bien compris. Lorsque tu pars d'un organe/tissu ou cellule, les protéines ne sont pas directement purifiable car non solubles, d'où la nécessité de les extraire. On utilise dans un premier temps un tampon de lyse associé à d'autres méthodes de lyse pour obtenir un meilleur résultat (lyse chimique, enzymatique, chimique, mécanique...). A ce stade, on obtient un homogénat. On réalise alors une centrifugation de l'homogénat pour séparer la fraction soluble, formant alors l'extrait brut, de la fraction insoluble. On obtient donc un surnageant correspondant à l'extrait brut dans lequel se trouve les protéines solubilisées et un culot contenant les débris/membranes cellulaires. On utilisera l'extrait brut pour la purification. J'espère que c'est plus clair pour toi, si tu as d'autres questions, n'hésite pas ! bon courage ! super c'est bien plus clair maintenant! Merci beaucoup Paul.f 1 Quote
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