Gaïa Posted April 24, 2016 Posted April 24, 2016 Bonjour! J'ai quelques petites questions par rapport au TD d'entraînement sur les protéines, l'item b du qcm 3 est faux, pour moi un seul "type" je comprends par rapport a la masse du coup je ne comprends pas... Et la c est vrai car on retrouve la protéine dans le surnagent?(même si c'est juste un peu? Je ne suis pas sûre de mon raisonnement) Ensuite l'item D du qcm 6 est faux car c'est pas des protéines membranaires? (On doit le savoir par rapport au cours ou sur le shema c'est visible?) Et je voulais une confirmation, quand on nous dit "on obtient une forme pure de la protéine" comme au qcm 17 A ou au 21 D il faut soit faire un SDS ou chromato d'affinité? Et le gel filtration ne permet pas d'avoir une forme pure dans tous les cas?
Charlas Posted April 25, 2016 Posted April 25, 2016 Est ce que tu pourrais envoyer une photo du cm? Parce que je n'ai pas le pôly de vos td et je ne peux pas t'aider du coup :/
Gaïa Posted April 27, 2016 Author Posted April 27, 2016 Je n'y arrive pas :/ Vous avez accès sur moodle?
Solution EdouardM Posted April 27, 2016 Solution Posted April 27, 2016 Salut! Je vais tâcher de te répondre en espérant que l'ordre des qcms est le même que l'an passé! QCM 3: item B: en fait on te demande si les hépatocytes ne synthétisent, pendant cette expérience, essentiellement qu'un seul type de protéine. Mais en fait, on a fait un Western-blot avec un anticorps dirigé contre une seule protéine, donc il est normal d'avoir une seule bande! Mais il y en a plein d'autres, qui ne sont juste pas révélées. L'item est bien faux. item C: oui tu as raison! On retrouve de la protéine dans le surnageant, c'est donc bien une protéine sécrétée, même si y'en a moins que dans la cellule! si ce n'était pas sécrété on ne devrait pas en retrouver dans le surnageant. QCM 6: item D: L'item est faux car ce n'est pas du tout ce qui se passe: L'EGF, qui est dans le milieu extracellulaire, va venir se fixer sur son récepteur, EGF-R, qui est transmembranaire. Cela active l'EGF-R qui est un récepteur à activité Tyr-kinase, il phosphoryle donc des Tyrosines qui lui appartiennent mais aussi des tyrosines d'autres protéines... En aucun cas c'est l'EGF qui transfère des groupements phosphates. Pour l'obtention d'une forme pure de protéine, je ne suis pas sûr de saisir ta question, mais voici ce que je peux t'en dire. Une chromatographie d'affinité est une méthode de purification, on ne retient que la protéine que l'on cible, car on sait qu'elle est affine pour le substrat qu'on a placé dans le tube (c'est théorique, il suffit qu'elle partage la même affinité qu'une autre protéine et du coup ce sera pas encore pure...). La pureté d'une protéine peut se voir en SDS-PAGE si l'on obtient 1 seule bande après purification. La gel-filtration, enfin, permet de séparer les protéines selon leur taille et dans des conditions non-dénaturantes, on peut alors établir une relation entre le volume d'élution et la masse moléculaire... Bref, le SDS-PAGE et la gel-filtration sont 2 techniques pouvant servir à dire si oui ou non la protéine est pure (on obitient une seule bande, ou un seul pic) mais ce ne sont pas des techniques de purification en elles-mêmes! J'espère avoir été clair^^ bonne fin de journée, n'hésite pas à nous dire si quelque chose te semble encore un peu obscur!
Gaïa Posted April 28, 2016 Author Posted April 28, 2016 Super merci beaucoup pour la réponse! J'avais pas fait attention; je m'étais focalisée sur le "membranaire"! Et donc si c'était EGF-R ce serait vrai, il phosphoryle aussi sur des protéines membranaires, pas que intracellulaire? (J'ai pas trouvé dans le cours où il nous montre des protéines membranaires c'est pour ça mais bon je pense pas que l'on nous piège sur ça quand même..!) Pour la purification je pensais avoir compris comme tu me l'as expliqué mais en fait dans des items avec la gel filtration comme le qcm 17A, il y a un seul pic et c'est faux mais peut être que c'est pas ça qu'il faut regarder? (Et du coup c'est pour ça que je me disais que l'on pouvait pas déterminer directement la purification avec cette technique mais qu'avec les bandes du SDS )
Ancien du Bureau JulieFinkel Posted May 5, 2016 Ancien du Bureau Posted May 5, 2016 Salut ! Oui, si on t'avait dit "EGF-R" alors ça aurait été juste, en effet . En ce qui concerne le 17A, il faut que tu regardes où se situe ton pic mesuré à 405 nm ! Tu vois qu'il fait à peu près 140 kDa alors que si la protéine était pure on aurait dû s'attendre à avoir 63 kDa (ce que tu n'as vraiment pas vu que même si le pic n'est pas exactement à 140 kDa, il est entre 67 et 140 kDa, et plutôt proche de 140 que de 67...). Tu peux donc en conclure que la protéine n'est pas pure . D'ailleurs l'item E nous aide pas mal à répondre à l'item A au final . Bon courage pour la fin !
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