Ouistiti Posted April 19, 2016 Posted April 19, 2016 Bonsoir ! J'ai (encore !) des questions en immuno ! Quelqu'un pourrait m'expliquer les items À et B de Rangueil 2014 QCM3 et le D du QCM 4 du même concours ? Ainsi que le 5, toujours le même concours J'aurais aussi besoin d'explications pour le QCM 2 de Purpan 2015 ! Et aussi pour Rangueil 2015 le 4 C,D et 5 C,D également ! Désolée pour toutes ces questions ! Et merci d'avance
Ancien du Bureau Solution JulieFinkel Posted April 21, 2016 Ancien du Bureau Solution Posted April 21, 2016 Salut !Désolée, je n'ai pas les annales de Rangueil 2014 et 2015, et je ne les trouve pas sur moodle. Peux-tu poster les QCM en photo ainsi que la correction stp ? Merci .En ce qui concerne le QCM2 de Purpan 2015 : Comme on te le dit dans l'énoncé du QCM 1, tu as deux formes de PrP : PrPc qui a une conformation normale, et PrPsc qu'on retrouve chez les animaux malades et qu'on suspecte avoir une conformation différente de PrPc. Mais ce qu'il faut bien comprendre c'est que PrPc et PrPsc ont la même séquence ! Il y a juste possiblement une différence de conformation. On sait également que la protéine K dégrade complètement PrPc en petits fragments indétectables, mais pas PrPsc parce PrPsc est une belle gosse et qu'elle est résistante à la protéine K B) . Comme Nogueira semblait être dans un bon jour lorsqu'elle a créé ce QCM, elle a précisé dans l'énoncé qu'un immunotransfert est dénaturant mais qu'une immunoprécipitation ne l'est pas ! Ici c'est précisé dans l'énoncé, mais il est bon de le savoir parce que souvent ce n'est pas précisé et il y a des pièges à gogo là-dessus alors il faut faire attention !Donc voilà les connaissances que l'on a lorsqu'on arrive à la fin de l'énoncé du QCM2. Maintenant, essayons de répondre aux items . Item A Cet item est composé de deux parties. En effet, on veut tout d'abord savoir si l'ACm1 reconnaît un épitope conformationnel, et ensuite on veut savoir si cet épitope conformationnel est présent uniquement sur la protéine PrPsc. - ACm1 reconnaît-il un épitope conformationnel ? Pour le savoir, on compare les résultats que l'on obtient avec ACm1 pour l'immunotransfert (dénaturant) et pour l'immunoprécipitation (non dénaturante). Dans notre cas, il n'y a pas de bande pour l'immunotransfert tandis qu'il y a bien un marquage pour l'immunoprécipitation. Cela signifie donc que l'ACm1 reconnait un épitope quand la protéine n'est pas dénaturée, mais lorsqu'on la dénature (perte de la conformation) ACm1 ne reconnaît plus l'épitope ! On a donc à faire à un épitope conformationnel et non séquentiel. Donc la première partie de l'item est juste. - Cet épitope conformationnel est-il présent uniquement sur la protéine PrPsc ? Pour le savoir, on regarde l'immunoprécipitation faîte pour l'ACm1, et on compare entre l'immunoprécipitation précédée de l'action de la protéine K et celle sans l'action de la protéine K. On remarque en observant le schéma que les deux bandes en IP pour l'ACm1 sont exactement identiques, que l'on ait action de la protéine K ou non. Cela signifie donc que la protéine K n'a pas agit dans ce cas-là. Or, on sait que la protéine K dégrade la protéine PrPc mais pas la protéine PrPsc. Comme les deux bandes sont exactement identiques et donc qu'on en déduit que la protéine K n'a pas agi, et qu'on sait que la protéine K n'agit pas sur la protéine PrPsc, alors on peut en conclure que l'épitope reconnu par l'ACm1 n'est présent que sur PrPsc . --> Comme les deux parties de l'item sont justes, alors l'item est juste ! Item B :Là également, l'item est en deux parties. C'est exactement la même méthode que pour l'item A. - L'épitope reconnu par l'ACm2 est-il conformationnel ? On compare l'IT avec l'ACm2 et l'IP avec l'ACm2 et on s'aperçoit que l'on n'a pas de bande pour l'IT tandis que l'on en a une pour l'IP : L'épitope reconnu par l'ACm2 est donc bien conformationnel. - Cet épitope est-il présent uniquement sur la protéine PrPc ? On compare l'IP avec l'ACm2 avec action préalable de la protéine K et l'IP avec l'ACm2 sans action préalable de la protéine K. On remarque que sans action préalable de la protéine K on a une bande alors qu'avec l'action préalable de la protéine K on n'a même pas un petit bout de bande : L'épitope n'est donc présent que sur la protéine PrPc (dégradée par la protéine K), car s'il était présent sur la protéine PrPc et sur la protéine PrPsc alors on aurait quand même une petite bande (certes plus fine mais tout de même existante) représentant la réaction avec les protéines PrPsc. --> L'item est donc vrai Item CLà aussi, deux parties dans le QCM (c'est souvent le cas en recherche, et dans plein d'autres matières aussi d'ailleurs). - L'épitope reconnu par l'ACm3 est-il accessible sur les deux formes dénaturées de PrP (c'est à dire PrPsc et PrPc) ? Pour le savoir, on regarde l'immunotransfert vu que c'est une technique dénaturante. On voit que pour l'immunotransfert avec l'ACm3, on a une bande pour la piste retranscrivant le "non traitement" préalable à la protéine K, et une bande un peu moins large pour la piste retranscrivant le traitement préalable à la protéine K. Donc cela signifie que lorsqu'on traite les protéines à la protéine K, il y a moins de protéines détectées avec l'ACm3 que lorsqu'on ne les traite pas à la protéine K, mais il y en a quand même ! Ainsi, on peut en conclure que l'épitope reconnu par l'ACm3 est accessible sur les deux formes de PrP, et comme on a regardé l'immunotransfert alors ce sont bien sur les deux formes dénaturées que l'épitope est accessible. - L'épitope reconnu par l'ACm3 est-il accessible sur les deux formes de PrP dans leurs conformations natives (c'est à dire non dénaturées) ? Pour savoir cela, on regarde l'immunoprécipitation avec l'ACm3, avec ou sans traitement par la protéine K. On observe qu'il n'y a pas de bande sur aucune de ces deux pistes, et donc on peut en conclure que l'épitope reconnu par l'ACm3 n'est accessible sur aucune des deux formes de PrP dans leurs conformations natives.--> L'item est donc vrai ! Item D :Cet item est faux car l'épitope reconnaît les protéines lorsqu'elles sont dénaturées (en immunotransfert) : c'est donc un épitope séquentiel. Item E :Oui, c'est d'ailleurs pour ça qu'elle n'est pas sensible à la protéine K. En gros, pour comprendre ce QCM il y a deux notions à avoir parfaitement réussi à dégager de l'énoncé : 1) Pour voir les formes dénaturées on regarde l'immunotransfert (technique dénaturante), et pour voir les formes natives on regarde l'immunoprécipitation (technique non dénaturante) 2) Pour voir les protéines PrPsc, on regarde les pistes (+) (avec traitement à la protéine K) car les protéines marquées mêmes après traitement par la protéine K seront celles qui n'ont pas été dégradées par la protéine K, c'est à dire les protéines PrPsc. Les pistes (-) permettent de voir les protéines PrPsc et PrPc. Voilà, et une fois que tu as bien compris ça dans l'énoncé tu peux répondre à tout, elle est pas belle la vie ?! Ah lala qu'est-ce qu'on aime l'immuno ! Voilà, j'espère t'avoir aidée, n'hésite pas si tu as besoin de plus d'explications, et n'hésite pas à poster les photos des autres QCM dont je n'avais pas l'énoncé . Bon courage !
Ouistiti Posted April 21, 2016 Author Posted April 21, 2016 Merci beaucoup c'est topissime comme explication ! Voila pour 2014 :https://drive.google.com/folderview?id=0B4uF_OYBgrX5bXNBaGFGV0MzamMJ'aimerais bien l'explication des QCM 3A,3B, 4D et les 5 en entier ....Et pour 2015 :https://drive.google.com/folderview?id=0B4uF_OYBgrX5Y2RDU2V4MHlxSkUJ'aimerais bien' que tu m'expliques s les items C et D des QCM 4 et 5 ! Merci beaucoup !!!
Ouistiti Posted April 22, 2016 Author Posted April 22, 2016 J'ai oublié de te mettre les réponses ! Rangueil 2014 3- ACDE 4-ABCDE 5-ABDE Rangueil 2015 : 3-ABCE 4-ABD 5-ABCD Merciiii
Ancien du Bureau Alexx Posted April 25, 2016 Ancien du Bureau Posted April 25, 2016 Salut ! Désolé pour l'attente, il faut trouver la motivation pour se plonger dans autant de QCM ^^ Alors : 2014 QCM3A :On t'indique que la protéine Tat a plusieurs isoformes à la suite d'épissages alternatifs. Je vais schématiser rapidement : ------------------------------***--------------------ooo----------------------------!!!--------------------------- (protéine Tat de 575kDa) ----------------***----------------!!!---- (protéine Tat de 85kDa issue d'épissage) ------------------------------***-------- (protéine Tat de 85kDa issue de clivage) (Je te met les 2 possibilités de 85kDa car on ne connait pas son origine) - On te dit que ton antisérum (pleins pleins pleins d'Ac) reconnait ABSOLUMENT TOUS les fragments de Tat. Donc la première colonne de ton Immunoprécipitation permet d'affirmer qu'il n'y a que 2 isoformes de Tat : 575 et 85. - L'Ac1 lui ne va pouvoir être spécifique que d'un motif particulier conformationnel ou séquentiel. SAUF que ton immunoprécipitation est en conditions dénaturantes !! Ton Ac1 est donc séquentiel - Maintenant, il suffit que Ac1 reconnaisse le motif "ooo" et BOOOOM dans ta colonne Ac1 il n'y a que la bande à 575 ! Item BIci, c'est juste parce que l'épitope n'est pas conformationnel même si tout le reste de la proposition est juste ! QCM 4DOn reprend notre protéine de 575kDa : ------------------------------***--------------------ooo----------------------------!!!--------------------------- (protéine Tat de 575kDa) On la clive : ------------------------------***-------- fragment de 175kDa ------------ooo----------------------------!!!--------------------------- fragment de 400kDa Ces 2 fragments sont libéréééés / délivréééés / sécrétééééés L'Ac1 c'est toujours le même, il reconnait "ooo" Tu n'observeras donc qu'une seule bande : celle du fragment de 400kDa, même si le fragment de 175kDa est présent dans le milieu ! Pour le QCM 5Ici, rien de très compliqué. Le but de ce genre de qcm est de vous faire remarquer les abérations, c'est tout ! Si un item te parait logique c'est qu'il l'est ! A : Ton AS reconnait bien le fragment de 175kDa dans l'extrait protéique total. Item OK ! B : Petite subtilité ici ! L'Ac2 est conformationnel (DotBlot positif alors que Immunoempreinte négative) mais la technique ElisaSandwich (ça me donne faim) n'est pas une technique dénaturante, donc tout va bien ! Item OK C : Ici c'est faut psk ton AS n'est absolument pas spécifique de cellules normales/cancéreuses, tu aurais donc tes tests positifs partout partout ! D : C'est très rapidement dit en cours il me semble mais la cytométrie en flux se fait sur cellule entière, donc pas de dénaturation, et le reste de l'item est tout à fait logique. Il oriente même sur le piège à remarquer. Item OK ! E : Normalement pas de soucis non plus ! QCM 2015 4C :Cet item est faux car l'immunoprécipitation est dénaturante (il me semble) et tu observes quand même une bande avec l'Ac1. Donc l'épitope n'est pas conformationnel ! 4D :Je pense qu'il me manque une info de l'exo 3 pour pouvoir répondre avec certitude. - L'Ac1 reconnait un épitope séquentiel sur la préP. - L'Ac1 reconnait ce même épitope séquentiel dans le fragment de 40kDa, mais est-ce que ce fragment n'est pas un "déchet" ? La Pmat n'est-elle pas le fragment de 160kDa ? QCM 2015 5Pour ce qcm (comme celui de 2014) il faut juste éliminer les items où y a un truc qui cloche : - C : Tu veux faire un Elispot et on te dit de mettre dans ton milieu le kératinocyte, l'Ac2-D et tu auras ton IFN sécrété. Pour l'Elispot tu as besoin de ton Ac et c'est à peu près tout... - D : ElisaSandwich. Egalement, t'as ton Ac et puis la vie est belle. Honnêtement c'est très tiré par les cheveux de vous demander ça et ça implique des mécanismes que Julie pourra peut être mieux t'expliquer que moi... Seul l'item E est faux psk là t'as pas d'Ac pour faire ton Elispot ! :/ Voilààààààààààààààà !
Ouistiti Posted April 25, 2016 Author Posted April 25, 2016 Y a aucun soucis pour l'attente et je suis désolée d'avoir autant de questions :s Juste par rapport à la 4C, je pense en fait que c'est l'immunotransfert qui dénature et donc lui a regarder non ?! Pour le 4D, y a pas d'information dans le QCM 3 :s on sait juste qu'on travaille sur une maladie de la peau nouvellement décrite et possiblement auto-immune et on veut savoir s'il y a des auto-anticorps (IgG) contre les antigènes protéiques de l'épiderme dans le sérum des patients ... Elle propose des techniques juste mais y a pas d'aide ni de données je crois ! J'ai une idée mais je suis pas sûre ! Dans l'énoncé on nous dit que l'Ac1 marque le cytoplasme et Ac2 marque faiblement le cytoplasme mais franchement la périphérie. On nous dit aussi que P-mat est exprimée à la membrane plasmique. Du coup, est ce que la forme de 160kDa reconnue par Ac2 ne serait pas l'epitope de P-mat par sa localisation ? Auquel cas le fragment de 40kDa serait un déchet ?! (Je sais pas si je suis claire et je ne sais pas non plus si ça colle ^^) merci beaucoup vraiment !
Ancien du Bureau Alexx Posted April 26, 2016 Ancien du Bureau Posted April 26, 2016 4C : Oui voilà, j'avais 1 chance sur 2 de dire une conn**** ^^ C'était l'une ou l'autre des techniques qui dénature 4D : C'est exactement ça ! P-mat est à la membrane -> donc le fragment de 160kDa reconnu par Ac2 en périphérie est la Pmat alors que le fragment de 40kDa reconnu par Ac1 cytoplasmique est le produit de clivage inutile Voilààààà
Ouistiti Posted April 26, 2016 Author Posted April 26, 2016 Oww je commence presque à comprendre un peu ^^ Merci beaucoup à toi et à Julie pour vos explications !
Ancien du Bureau JulieFinkel Posted May 5, 2016 Ancien du Bureau Posted May 5, 2016 Coucou la compagnie . Oui, c'est l'immunotransfert qui dénature, et l'immunoprécipitation qui est non dénaturante ! Petit moyen mnémotechnique pour éviter tout stress au moment du concours : dans "immunoprécipitation" il y a le son [on] qui rappelle le son [on] de "non" pour "non dénaturante". Désolée j'ai trouvé que ça mais bon ça fonctionne ! Courage pour le concours, c'est bientôt fini !!! .
Ouistiti Posted May 5, 2016 Author Posted May 5, 2016 mercic beaucoup pour ces précisions et ce précieux moyen mnémotechnique !!!
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