question pharmacométrie

[seringuer]

Bonjour, en cours d'ICM aujourd'hui concernant la pharmacométrie, on a vu que lors de l'expérience BRET si le ligand est agoniste il y aura activation et la distance entre les partenaires BRET augmente , ensuite on a vu que pour un agoniste inverse il y a un pré-couplage suivie d'un découplage  et un éloignement de la protéine G, alors ma question est que le ligand soit agoniste ou agoniste inverse c'est la même chose ? je n'arrive pas à voir la nuance. ( PS : désolée pour le pavé)

[Dr_Zaius]

Coucou @seringuer !

 

Le principe du BRET c'est d'utiliser deux protéines : la luciférase et la GFP et de mesurer l'intensité de luminescence produite en fonction de la distance de ces deux protéines. C'est la luciférase qui transmet son énergie à la GFP si elle se rapproche à 100 Angstrom. Et par conséquent la GFP qui émét la luminescence mesurée si elle se trouve à moins de 100 Angstrom. Maintenant il faut utiliser ces 2 molécules pour étudier le RCPG.

 

2 possibilités s'offrent à nous avec ces 2 molécules (l'option choisie sera toujours précisée dans l'énoncé du QCM): 

 

1) Connaissant le fonctionnement du RCPG et sachant que lorsqu'il est actif la sous-unité α de la protéine G se découple du complexe βƔ alors on place la luciférase sur la sous-unité α et la GFP sur le complexe  βƔ pour mesurer leur éloignement.

 

2) On peut également choisir de marquer le RCPG (au niveau des domaines transmembranaires) d'un côté avec la luciférase et la protéine G de l'autre avec la GFP. Car on sait qu'un RCPG est précouplé avec la protéine G-αβƔ. Parcontre à ce moment là on s'intéressera plutôt à l'activité "constitutive" c'est à dire "initiale et au repos" du récepteur.

 

Que se passe-t-il après liaison d'un ligand agoniste ?

Et bien cela dépend des deux cas cités précédement !

 

1) Dans le cas 1 (luciférase et GFP respectivement lié aux s.u α et βƔ) alors à ce moment là on comprend que la liaison d'un agoniste, va découpler la protéine G et les s.u α et βƔ vont s'éloigner, ce qui entraînera une diminution du signal BRET observé. Maintenant si c'est un agoniste inverse qui se fixe alors on assistera à un rapprochement des s.u α et βƔ et cela entraînera une augmentation du signal BRET observé.

 

2) Dans le cas 2, la liaison d'un agoniste va entraîner un maintient ou une augmentation (en fonction du ligand agoniste) du signal BRET mesuré car on n'observera pas un éloignement de la protéine G du récepteur (maintient de l'activité constitutive). À l'inverse si un agoniste inverse se fixe on assite à une dimunition du signal BRET et un éloignement de la protéine G du récepteur (diminution de l'activité constitutive du RCPG).

 

En espérant que tu y vois plus clair maintenant !

Bon courage 

 

 

[seringuer]

merci pour ta réponse je comprend mieux la nuance et du coup dans le premier cas la luciférase est avec la ss-unité alpha et le GFP avec le complexe bêta-gamma car il a eu une activation alors que dans le deuxième cas il n'y a pas eu d'activation donc les ss-unités alpha-bêta-gamma sont associées et la luciférase est liée tt de même à alpha et la GFP à bêta-gamma ? 

et deuxième question, dans le deuxième cas ensuite tu parles d'une liaison avec un agoniste sans qu'il y ait activation donc maintien de la distance et du signal BRET mais pour ne pas qu'il y ait d'activation et donc d'éloignement des ss-unités n'y a-t'il pas plutôt une liaison avec un antagoniste ? 

[Dr_Zaius]

@seringuer,

Dans le premier cas c'est bien ce que tu décris. Parcontre dans le deuxième cas il faut comprendre qu'en l'absence de ligand il y a un "pré-couplage" de la protéine G avec le récepteur transmembranaire, à l'origine d'une activité consitutive du récepteur. Donc si je place la luciférase sur les domaines transmembranaires du récepteur, et la GFP sur la protéine G, on va voir que dans le cas d'un agoniste inverse, quand celui-ci se fixe au récepteur on assiste à un découplage de la protéine G et du récepteur et la suppression de l'activité constitutive, dont la diminution du signal BRET (dans ce cas) est le témoin.

Edited September 28, 2023 by Dr_Zaius

[seringuer]

merci beaucoup ça m'a bien éclairé !!!