annale

[Passover]

Bonjour

j'ai du mal à comprendre pourquoi l'item b est juste si bamh1 à  3 sites ( en comparaison avec l'item suivant, ou prend en compte les sites )

ps: jsp si j'ai été clair 

merci d'avance

 

 

[Cassolnousmanque2]

Coucou @Passover

Tu as un site BamH1 et part et d’autre du promoteur que tu veux insérer donc il n’y a aucun soucis à utiliser cette EdR pour réaliser le clonage 

 

Je ne vois pas pourquoi tu parles de 3 sites

On en aura seulement 2 dans le plasmide recombinant 

 

Dans l’item C on fait référence au plasmide recombinant qu’on a réellement construit avec Pst1 et BamH1 donc effectivement on va juste linéariser le plasmide puisqu’il n’y a qu’un seul site BamH1 

 

Par contre si on prenait la construction proposée dans l’item B alors on se retrouverait avec 2 fragments 

 

C’est plus clair pour toi ? 

[Passover]

Oki merci d'avoir pris le temps de me répondre <3, je viens de voir que je m'étais trompé item c'était l'item c et non b ou l'on ou parle des sites de restrictions, je veux bien que tu me réexplique stp ( comment pouvons nous savoir que l'on prenais en compte pst1 pour l'item c et non dans l'item d ? )

[Cassolnousmanque2]

Pour l’item C tu prends le plasmide recombinant qu’on te dit dans l’énoncé 

donc on te dit qu’on fait le clonage avec BamH1 et Pst1 (« Pour cela, il a choisi de digérer le plasmide pPROM (carte ci-dessous à droite) par les mêmes enzymes BamH1 et Pst1 »)

 

Une fois que tu as identifié les EdR qu’on utilise, alors tu vas dessiner le plasmide recombinant que tu obtiens sur ton brouillon en faisant bien apparaître les nouvelles positions des EdR dessus (je passe vite là-dessus, si jamais ce n’est pas clair pour toi tu me dis)

 

Maintenant pour l’item D tu utilises ce schéma que tu as fait au brouillon et tu regardes combien de sites de restriction tu as 

On te dit qu’on fait une digestion avec HindIII et tu as donc 4 sites pour cette EdR

- 2 sites HindIII sur l’insert à 810 et 1120 pb

- 2 sites HindIII sur le plasmide pPROM initial à 1200 et 2600 pb 

 

(attention les positions de ces sites de restriction vont varier avec l’ajout du fragment, d’où l’importance de te faire le schéma que je t’ai dit

en gros on va faire plus simple si tu ne fais pas le schéma tu as 10 chances sur 10 de te planter dans les calculs donc FAIS LE DESSIN !!!!!)

[Passover]

okay merccccccciiii