QCM 2 -2018 Maraichers

[Sylicium14]

Salut, 

J'ai pas bien compris comment avec Hind III on peut vérifier le sens d'insertion, j'ai compris pourquoi il permet de vérifier si l'insertion à fonctionner mais j'avoue que je bloque sur ça. Si quelqu'un aurait la gentillesse de me l'expliquer 

Merci d'avance :)

https://zupimages.net/viewer.php?id=23/11/f0hl.png

[Cassolnousmanque2]

Coucou @Sylicium14, 

 

alors l’explication longue et détaillée tu l’as par le calcul : 

Si j’insère le fragment dans le premier sens : 

Dans pBêtaGlobine, HindIII est situé à 3800 - 3600 = 200 pb de BamH1

Donc une fois intégré dans le plasmide recombinant, il sera à 820 + 200 = 1020 pb 

Donc entre le HindIII initialement présent sur pRH et le HindIII de l’insert on aura : 1020 - 810 = 210 pb 

 

Maintenant, si j’insère le fragment dans le deuxième sens, 

Dans pBêtaGlobine, HindIII est toujours situé à 200 p de BamH1

Mais une fois intégré dans le plasmide recombinant, il sera plus loin du HindIII initialement présent sur pRH 

Pour le calculer il nous faut la taille de l’insert 

Ici c’est 4600 - 3600 = 1000 pb 

Donc ça veut dire que dans le plasmide recombinant il sera placé à 810 + 1000 - 200 = 1610 pb

(on met - 200 parce qu’on a compté 200 pb en trop en allant jusqu’à 1000)

Donc entre le HindIII initialement présent sur pRH et le HindIII de l’insert on aura : 1610 - 810 = 800 pb 

 

Maintenant, la technique rapide : 

Tu regardes la position de HindIII dans ton insert

- Si il est au milieu de ton insert -> tu ne pourras pas déterminer le sens d’insertion de ton insert grâce à cette EdR

- Si il n’est pas au milieu de ton insert -> tu pourras déterminer le sens d’insertion de ton insert grâce à cette EdR

 

Voilà, j’espère avoir pu t’aider !

[Sylicium14]

c'est parfait merci bcp !!!

il y a 5 minutes, Cassolnousmanque2 a dit :

Maintenant, la technique rapide : 

Tu regardes la position de HindIII dans ton insert

- Si il est au milieu de ton insert -> tu ne pourras pas déterminer le sens d’insertion de ton insert grâce à cette EdR

- Si il n’est pas au milieu de ton insert -> tu pourras déterminer le sens d’insertion de ton insert grâce à cette EdR

Je pense que je vais plus retenir ça, j'aurais moins de chance m'embrouillé dans le raisonnement 

[Cassolnousmanque2]

il y a 18 minutes, Sylicium14 a dit :

c'est parfait merci bcp !!!

Je pense que je vais plus retenir ça, j'aurais moins de chance m'embrouillé dans le raisonnement 

D’acc, après il faudra nécessairement qu’il y ait 2 sites minimum pour l’enzyme de restriction (ou les enzymes) que tu utilises

Parce que si tu as un seul site tu vas juste linéariser le plasmide !!

(je pense que tu l’avais compris mais au cas où je préfère préciser)