ALAID

[Passifacile]

Hellooo! Dans le qcm 2b, qui est compté juste, on me dit que c'est pas gênant si un seul des 2 ac reconnait la forme liée... Quelqu'un saurait m'expliquer pourquoi? Parce que pour moi ça biaise forcément les résultats...

https://ibb.co/gVQVrPX
https://ibb.co/VDHJPn5

[Cassolnousmanque2]

Coucou @Passifacile, est ce que tu peux mettre le sujet du qcm 2 s’il te plait ? Parce que là tu as mis celle du qcm 4 et 5 donc c’est difficile de te répondre ;)

[barbiedocteur]

Coucou @Passifacileje reviens vers toi je sais pas si t'as eu ta réponse, si non tu peux peut etre de nous joindre le QCM 2 ;)

[Passifacile]

Merdeeee ptn j'suis désolé j'ai complètement zappé.... Alors c'est le 5b pardon 

[barbiedocteur]

Ok parfait haha

Du coup ici les AC1 et AC5 reconnaissent tout les 2 le PSA libre. Pour le savoir, tu regarde ton ELISA, et tu vois que la densité optique augmente en présence de ces 2 AC, ce qui signifie qu'ils interagissent avec le PAS-libre. (cf ELISA sandwich avec un marquage secondaire à la peroxydase). 

En revanche, là où ça peut porter à confusion, c'est que en effet en immunotransfert, tu as un marquage avec AC1 mais pas avec AC5. Qu'est-ce que ça veut dire ? Un immunotransfert se fait en conditions dénaturantes, donc il ne nous permet de voir que les épitopes séquentiels. En immunotransfert tu as un marquage au niveau de l'AC1, donc l'AC1 interagit avec le PSA-libre en condition dénaturante, l'interaction se fait au niveau d'un épitoge séquentiel. 

Et tu n'as pas de marquage au niveau de l'AC5, mais ce n'est pas parce que il n'interagit pas avec le PSA-libre (puisqu'on a un marquage en ELISA), mais parce que il interagit avec le PSA-libre au niveau d'un épitoge conformationel, qui a donc été détruit par les conditions dénaturantes !

 

Tu peux donc utiliser AC1 et AC5 pour faire une ELISA sandwich et mesurer spécifiquement le PSA-libre, parce que ils interargissent tout les 2 avec le PSA-libre et surtout il interagissent tout les 2 au niveau d'un épitoge différent du PSA-libre : un conformationel et un séquentiel, et ça c'est absolument nécessaire pour pouvoir faire une ELISA sandwich. 

 

Si t'as besoin de plus d'entrainement là-dessus je te conseille de jeter un coup d'oeil sur la forma Recherche UE8 qu'on a fait, le diapo est sur la librairie !

[Passifacile]

Okkkkkk nickel merci bcp!

[Passifacile]

Attends en relisant je me rends compte d'un truc, jusqu'à là je te suis complètement, mais si l'AC1 interagit aussi avec la PSA liée, alors il n'y a pas le risque qu'on ne compte pas seulement la psa libre (sérique) mais aussi la psa liée?

[barbiedocteur]

En effet l'AC1 reconnait aussi la PSA liée, mais pas l'AC5 ! Donc tu fais ton ELISA sandwich avec AC1 et AC5, AC1 va faire une réaction croisée avec le PSA lié, mais comme l'AC5 ne le reconnaîtra pas on n'aura pas de marquage. Je te remet le schéma de l'ELISA sandwich pour illustrer mes propos, mais pour avoir un marquage il faut que les 2 anticorps différents se lient à la molécule d'intérêt au niveau d'un épitope différent. 

Donc en faisant une ELISA sandwich avec AC1 et AC5 on aura ça :

https://zupimages.net/viewer.php?id=23/11/e3jn.png

en fonction de comment on s'organise, soit on marque AC5 avec la peroxydase (en noir), ou alors on marque AC1 (en bleu), mais dans les 2 cas tu as un produit soluble coloré qui est libéré. 

 

Et en effet, comme on a une réaction croisée de l'AC1 avec le PSA lié, on aura ça qui va se passer :

https://zupimages.net/viewer.php?id=23/11/mwmg.png si on utilise un support spécifique du fragment Fc de l'AC1

https://zupimages.net/viewer.php?id=23/11/688h.png si on marque l'AC1 avec la peroxydase

Et dans les 2 cas, tu n'aura pas de marquage, soit dans le cas 1 parce que tu n'as pas d'anticorps de révélation, soit dans le cas 2 parce que le PSA lié ne se lie pas au support. Donc sans marquage, ça fausse pas tes résultats !

 

Hésite pas si c'est pas clair

[Passifacile]

Ok c'est bon là c'est hyper clair merci!!!