Question QCM3 polys de printemps recherche

[btfe]

Salut salut. 

 

En faisant les QCM supplémentaires du polys de printemps sur la recherche je suis tombé sur un item où je ne comprend absolument pas la correction:

C'est l'item B. C'est compté comme Faux parce que: "Sachant qu'on a utilisé BamH1 pour intégrer l'ADNc codant la BLG à pBLG, réutiliser ces enzymes pour déterminer si le fragment est correctement orienté sera impossible." Est-ce que ce serai possible de m'expliquer précisément pourquoi on ne peux pas réutiliser les BamH1 parce que je ne vois pas du tout ... 

 

Merci d'avance :) 

[the_last_dandelion]

Coucou @btfe !

Tu as utilisé BamH1 pour insérer le fragment, si tu digères ton nouveau plasmide obtenu, la seule chose que tu obtiendras, ce sera ton ancien plasmide avant ajout du fragment, et le fragment seul, mais en aucun cas cela ne pourra t'orienter sur le sens d'insertion du fragment ! 

Pour pouvoir avoir une information sur le sens d'insertion, il aurait fallu utiliser EcoR1 s'il avait un autre site de restriction sur le plasmide (à la place de Not1 par exemple).

Je te fais une explication théorique - on considère ici qu'on a deux sites pour EcoR1 : celui qui existe déjà, et celui à la place de Not1 : 

On digère le plasmide par EcoR1, on peut obtenir deux cas : 

- Un fragment de 2770 pb et un fragment de 1530 pb --> mon insert est dans le bon sens = sens où il est dans le schéma.

- Un fragment de 2170 pb et un fragment de 2130 pb --> mon insert est dans le mauvais sens = les sites de restrictions de BamH1 au niveau du fragment se sont accrochés "à l'envers" sur mon plasmide (tu as d'abord un "grand bout" - site de restriction de EcoR1 - "petit bout", à l'inverse du schéma). 

[btfe]

@the_last_dandelion Merci beaucoup pour ta réponse très détaillée ça y est je vois comment ça fonctionne alors ;) 

Merci !