Isoélectrofocalisation

[maya-]

Bonjour, je suis un peu perdue sur la partie du cours de Lajoie traitant de l'IEF. J'ai écrit dans mes notes qu'une protéine avec un pi acide migrera vers le pôle (+) de la matrice et donc vers le ph acide. Mais du coup ce n'est pas la même chose que la chromatographie échangeuses d'ions ? Car dans cette dernière une protéine avec un pi<pH sera chargée (+) et migrera donc vers le pôle (-) il me semble.

 

C'est bien ça ?

 

(désolée si ce n'est pas très clair ce que je raconte...)

[Pickett]

Coucou, alors c'est différent, en général tu combines l'IEF avec un SDS page juste après (électrophorèse bidimensionnelle) . Au cours de l'IEF, tu as une séparation des protéines en fonction de leur pI sur un gel d'électrophorèse qui a un gradient de ph. Du coup les plus acides migrent dans des zones de pH faibles jusqu'à atteindre leur pI ou elles vont se focaliser par exemple. Après cette étape tu déposes ton gel d'IEF sur un gel sds page et tu sépares les protéines en fonction de leur PM.

Dans la chromatographie échangeuse d'ions, la finalité n'est pas la même, c'est une technique de purification selon la charge des protéines. Quand pH est inférieur au phi la protéine est chargée + et sera retenue sur une colone échangeuse de cations (les bords de la colone chargés -) 

Donc dans le cadre d'une électrophorèse bi dimensionnelle qui combine IEF + SDS page on va obtenir des petits spots qui vont permettre de déterminer le pi et le Pm, là ou la chromatographie va te permettre de purifier un extrait brut (après ajout de solution de lavage --> les protéines non retenues sortent, par exemple si tu fais une chromato echangeuse d'anions, les protéines chargées + sortent après lavage. Puis ensuite tu ajoutes une soltion d'élution ou la tu vas récuperer uniquement les protéines fixés à la colone, celles que tu veux (au passage cette elution se fait par modification du ph ou par ou augmentation de la force ionique..))

J'ai pu t'aider ??

[Cassolnousmanque2]

Coucou @maya-, 

alors je complète la réponse qui t’a été donnée au dessus parce que je pense que tu confonds migration dans un gel d’électrophorèse et le principe des chromatographies sur colonne :

Dans une chromatographie échangeuse d’ions il n’y a pas de migration mais des interactions électrostatiques : la protéine chargée - de la phase mobile interagit avec la protéine chargée + de la phase stationnaire dans le cas d’une colonne échangeuse d’anions 

 

 

[maya-]

@Pickett @Cassolnousmanque2 merci pour vos réponses, en effet j'avais tout embrouillé dans ma tête. C'est beaucoup plus clair désormais !