Incompréhension qcm

[Passifacile]

Helloooo à l'item C qui est compté juste, on nous dit que l'antiDSG1 est séquentiel, mais je vois pas comment onna l'info. Certes on est en dénaturante, mais pour moi on évalue que la molécule JAC là pas l'anticorps...

https://ibb.co/djcZ1Bk

 

Edited March 7, 2023 by Passifacile

[Cassolnousmanque2]

Salut @Passifacile

tu veux savoir si les protéines Jac interagissent avec les protéines DSG1 

et comme tu l’as dit tu es en conditions dénaturantes donc tous les ponts disulfure sont éliminés 

puisque tu as une interaction entre l’anticorps et la protéine alors l’épitope est forcément séquentiel puisque la conformation n’est pas préservée 

 

dis moi si c’est clair ou pas 

bon courage pour les révisions ! 

[Passifacile]

Alors jusqu'à là je comprends, mais qui nous dit que les 2 ne reconnaissent pas un épitope complètement différent? Et que dcp le fait que l'un reconnaisse un séquentiel n'impacte l'autre en rien?

[Cassolnousmanque2]

Alors même si l’épitope est différent, le fait que le SDS Page soit en conditions dénaturantes fait en sorte que la conformation de la protéine DSG1 soit perdue 

Donc si l’épitope qui permettait l’intéraction de la protéine et de l’anticorps correspondant n’était pas séquentiel alors il n’y aurait pas de reconnaissance et tu n’aurais pas de bande sur l’immunotransfert 

[Passifacile]

J'suis désolé j'ai l'impression d'être débile ou de chercher trop loin. Mais pour moi dans ce qcm on ne fait la recherche que avec la JAC, en aucun cas avec l'anti corps anti DSG1. Donc on ne devrait pouvoir tirer des infos que de la JAC non???

[Cassolnousmanque2]

@Passifacile

T’excuse pas je te réexplique 

Je reprends les phrases de l’énoncé 

«  Pour cela, la molécule Jac a été couplée à des billes d’agarose (+) et incubée soit avec la rDsg1 (Figure 1A), soit avec un extrait protéique d’épiderme humain (Figure 1B) » 

-> Donc on incube la molécule Jac et la protéine rDsg1 dans un extrait (sous entendu on veut vérifier que ça intéragit bien)

 

 «  Après centrifugation et lavages des billes, les molécules accrochées à la molécule Jac ont été libérées par chauffage et soumises à une électrophorèse en PAGE-SDS en conditions dénaturantes »

-> Donc on récupère les molécules qui ont interagit avec Jac, on les garde dans un tube et on va casser tous les ponts disulfure sur toutes les molécules (= aucune conformation n’est préservée, on se retrouve seulement avec la séquence primaire d’acides aminés)

 

 « suivi d’un immuno transfert utilisant un anticorps monoclonal anti-Dsg1 humaine » 

-> Donc on veut regarder si la protéine Dsg1 est présente dans l’échantillon (sous entendu si elle est présente alors c’est qu’elle a intéragit avec la protéine Jac)

 

Donc ton anticorps va juste permettre de vérifier que ta protéine d’intérêt Dsg1 est là

Sauf que comme on a cassé tous les ponts disulfure alors tu n’as plus aucune structure en 3D (donc plus d’épitope conformationnel non plus s’il y en avait)

 

Donc puisqu’il y a reconnaissance de la protéine Dsg1 par l’anticorps antiDsg1 (tu as une bande), c’est qu’il y a forcément eu une interaction via l’épitope 

Et comme je viens de t’expliquer qu’il n’y a aucun épitope conformationnel qui a pu être conservé (à cause des conditions dénaturantes), alors c’est forcément que l’épitope est séquentiel  (en gros y a pas d’autre solution, sinon l’anticorps n’aurait pas reconnu la protéine)

 

Tu vois mieux ? 

[Passifacile]

Okkkkkk je vois, j'avais pas l'étape ou on vérifiait la présence par l'ac!!!! En gros comme on voit une présence en "contrôle" et malgré les conditions dénaturantes, alors il est séquentiel! Merci tu gères de fouuuuuu