adelinel Posted November 26, 2013 Posted November 26, 2013 Bonjour à tous, J'ai besoin de quelques explications sur la PCR quantitative. En fait je n'ai pas saisi ce que représente chaque courbe, les différentes phases, etc. Merci à vous pour votre aide.
Guest Ambre Posted November 26, 2013 Posted November 26, 2013 Chaque courbe représente une amplification de PCR indépendante dans un tube différent Lors de la phase exponentielle de croissance, il y a une phase d'amplification de la PCR et c'est seulement pendant cette phase la que la quantité d'ADN amplifié sera proportionnelle à la quantité de départ. Moins il faut faire de cycle de PCR, et donc d'amplification, plus la quantité d'ADN de départ sera importante. On détermine la quantité d'ADN en début de phase exponentielle : l'ADN est couplé au SYBR green (fluorophore) et l'émission de fluorescence mesurée sera proportionnelle à la quantité d'ADN amplifié qui sera proportionnel à la quantité d'ADN de départ. Ensuite il y a la deuxième phase : le plateau. Elle correspond à la limite de production car à force les amorces ne seront plus utilisables et l'enzyme aussi. Dans cette phase là, il n'y a plus de proportionnalité entre la quantité d'ADN amplifié et la quantité d'ADN de départ.
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