Insertion orienté

[melaniedmrg]

Bonjour
Cette notion est un peu flou pour moi. Il me semble que pour avoir une non orienté on utilise qu'une enzyme et si on veut une orienté on utilise 2 enzymes?
Concrètement qu'est que cela change?
Merci d'avance
 

[Laetitiar]

Salut !

 

Si on digère un vecteur et un ADNc avec une seule enzyme de restriction, on aura en effet un clonage non orienté.

Les extrémités seront toutes compatibles, et l'ADNc pourra alors s'insérer dans les deux sens : on pourra donc avoir un vecteur vide (qui n'a pas inséré l'ADNc), un vecteur sens (avec l'ADNc dans le sens du promoteur), ou un vecteur anti-sens (avec l'ADNc dans le sens inverse)

 

Si on utilise deux enzymes, on aura un clonage orienté, et l'ADNc ne pourra s'insérer que dans un seul sens : on aura alors soit le vecteur vide, soit le vecteur sens.

 

Voilà j'espère que c'est plus clair