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[APOLLINE.]

bonjour je ne comprends pas pourquoi l'utilisation d'un extrait protéique total dans une technique de dot blotting ne nous permet pas de connaitre un poids moléculaire? pourriez vous m'aider svp? 

[TutMarion]

Coucou @APOLLINE.,

En fait dans un Dot Blot tu dépose ton extrait cellulaire directement sur une membrane de nitrocellulose (et ensuite tu fais souvent un marquage indirecte pour analyser ton extrait). Cela ne te permet alors pas de connaitre le poids moléculaire.

 

Pour que tu comprennes mieux, je te donne le cas contraire: si tu analyses ton extrait protéique total à l'aide d'un Western Blot.

Dans ce cas la, tu fais d'abord une électrophorèse (ou SDS-PAGE) puis tu transfert sur une membrane de nitrocellulose (pour ensuite venir analyser par marquage indirect).

Ici, cela te permettrait alors de connaitre ton poids moléculaire car c'est ton résultat d'électrophorèse qui te donne cette information.

En effet, dans une électrophorèse tu fais migrer ton extrait protéique à l'aide d'un champ électrique et les protéines migrent et sont séparées selon leur masse.

A l'aide d'un marqueur de taille, tu peux alors connaitre le poids moléculaire de ta protéine d'intérêt.

 

Dans un Dot Blot tu ne fais pas d'électrophorèse et tu n'as donc pas de renseignement sur le poids moléculaire!

Voila, j'espère que c'est plus claire sinon n'hésites pas à me dire.

Bon courage à toi :)

[clatat]

Salut ! la technique de dot blotting permet de détecter la présence d'une certaine protéine dans un extrait en incorporant des Ac qui vont cibler cette protéine. Cet extrait n'est pas "trié", c'est comme un gros "tas", ou tu vas mettre des anticorps qui vont te permettre d'identifier des protéines. 

Pour connaitre le poids moléculaire d'une protéine, il faut que tu fasses une SDS page . 

Et pour avoir les deux, donc identifier une protéine et connaitre son poids moléculaire , tu devras réaliser un western blot. 

 

dis moi si c'est plus clair ? 

[APOLLINE.]

d'accord, merci beaucoup j'ai compris