chroma échangeuse d'ions

[khaled]

https://zupimages.net/viewer.php?id=23/07/hooe.png

salut j'ai un peu du mal à comprendre l'explication que j'ai mis entre parenthèses

je comprends pas pourquoi au lavage les charges (+) sortent et quand on met la solution d'élution les charges (-) sortent? 

c'est bête comme question mais j'aimerais que ce soit 100% clair pour moi..

[Cassolnousmanque2]

Re coucou @khaled, 

alors si tu as une colonne échangeuse d’anions par exemple (comme sur le schéma de la diapo) : 

- les protéines anioniques (donc chargées -) seront retenues sur la colonne qui a pour phase stationnaire des cations (chargés +)

- au moment du lavage, les protéines chargées + ne seront pas retenues 

- au moment de l’élution, on fera passer des protéines chargées - qui ont une plus forte affinité pour la phase stationnaire, donc les protéines anioniques qui s’étaient accrochées au départ vont se décrocher 

 

Tu comprends mieux ? 

[ju18]

Salut !! Dans cet exemple c'est une chromatographie échangeuse d'anions : ta colonne (phase stationnaire) est chargée + pour retenir les anions donc (chargés -). Lors du lavage, ce sont les cations qui sortent comme ils n'ont pas été retenus par la colonne. Donc tu n'as que tes anions sur la colonne. Et lors de l'élution, comme tu ajoutes une solution à très forte charge inverse à celle de la colonne, ce sont les anions qui vont se détacher car les fortes charges - vont prendre leur place.

C'est plus clair ?  

[khaled]

@Cassolnousmanque2@ju18 merci à vous deux!! c'est parfait

[khaled]

@Cassolnousmanque2je reviens pour poser une petite question sur le même sujet 

si le point isolélectrique est supérieur au pH alors on a chromatographie échangeuses de cations, et donc la protéine concernée sera dans la fraction non retenue?

on retient seulement si pH > pI? 

[Cassolnousmanque2]

@khaled

Si pH < pHi, alors la protéine est chargée + 

Si pH > pHi, alors la protéine est chargée - 

 

donc sur une colonne échangeuse de cations, si pHi > pH, alors la protéine sera retenue sur la colonne 

Par contre, sur une colonne échangeuse d’anions, elle sera dans la fraction non retenue 

 

C’est plus clair pour toi ?