QCM recherche segui ft clavel

[davidd]

 

Salut pourriez vous m'aider s'il vous plait je ne comprends pas ce qcm .... 

Merci d'avance 

David 

[mariannémie]

Salut ! Qu'est ce que tu ne comprends pas exactement ?

[davidd]

Salut

La notion de LCR A depletée fait que je comprends pas l'item E 

Penses tu pouvoir me dire en 3 mots ce qu'il faut voir a chaqque items car je ne pense pas que ma comprehension soit suffisante ... 

[Cassolnousmanque2]

Coucou @davidd, 

Tu essayes de savoir s’il y a une interaction entre les auto anticorps LCRA et AK5 ainsi qu’entre les auto anticorps LCRB et AK5

Tu te places dans des cellules C qui n’expriment pas AK5 et tu fais exprimer AK5 dans certaines d’elles en utilisant un vecteur plasmidique de clonage (cf le cours du Pr Couderc)

A priori, dans tes hypothèses pré expérimentales, tu penses qu’il y a bien une interaction entre les auto anticorps LCRA et AK5 ainsi qu’entre les auto anticorps LCRB et AK5. Tu veux le vérifier.

 

Tu fais une chromatographie d’affinité en plaçant AK5 sur la phase stationnaire et tu fais passer 3 choses : 

- soit les auto anticorps du LCRA

- soit ceux du LCRB

- soit le LCRA déplété (pas d’anticorps) 

 

On te dit que le LCRA déplété n’est pas retenu par la colonne => c’est ton témoin (tu t’y attendais vu qu’il n’y a pas d’anticorps)

Donc dans cette expérience tu as 2 témoins : la colonne AK5 - où tu t’attends à ne pas avoir de bande puisque sans AK5, les auto anticorps de LCRA et LCRB ne peuvent pas intéragir et la colonne LCRA déplétée où pareil il n’y a pas d’interaction 

 

A) Tu as une bande pour les auto anticorps de LCRA avec AK5+ et pas de bande avec AK5 -> item V (si on n’avait pas le contrôle AK5- on n’aurait pas pu l’affirmer)

B) On va reconnaître grâce à des anticorps des épitopes séquentiels (pas des conformationnels à cause de l’étape de dénaturation !)

E) La différence entre les auto anticorps LCRA et LCRA déplété c’est que le premier peut potentiellement s’accrocher à AK5 grâce à ses auto anticorps (c’est ce que tu veux démontrer) et que le deuxième ne s’accroche pas (ça tu en es sûr) de part l’absence d’anticorps 

Comme avec les auto anticorps de LCRA tu as une bande mais pas avec LCRA délété alors effectivement tu as confirmé l’interaction entre les auto anticorps LCRA et AK5 

 

C’est plus clair pour toi ? 

[mariannémie]

Pour l'item A, on voit sur le premier immunotransfert qu'on a une bande à 70 kDa pour les cellules AK5+ en présence d'anticorps purifiés à partir du LCR-A donc l'AK5 est bien un antigène cible des auto-anticorps présents dans le LCR-A.

 

Pour l'item B, les auto-anticorps peuvent reconnaître des épitopes séquenciels portés par AK5 mais en revanche ils ne pourraient pas reconnaître des épitopes conformationnels car la protéine est dénaturée lors de l'immunodéficitaire-transfert. 

Pour l'item C, comme l'anticorps monoclonal est un anticorps de souris et que les auto-anticorps sont des anticorps humains, on pourrait utiliser comme anticorps secondaires un anticorps anti-partie constante de souris et un anticorps anti-partie constante humaine avec des flurochromes de couleur différente ce qui permettrait de voir que les cellules reconnues sont les mêmes en superposant les images.

 

Pour l'item D, l'ELISpot permet de quantifier les cellules sécrétrices d'antigènes donc je pense que l'item est faux. 

 

L'immunotransfert avec le LCR-A déplété est un contrôle, c'est le LCR-A sans auto-anticorps anti-AK5. Cela permet de montrer que l'expérience s'est bien déroulée (que l'expérience n'a pas été "contaminée" par des anticorps anti-AK5). Comme l'immunotransfert montre que le LCR-A déplété ne reconnaît pas AK5+, si l'immunoflluorescence ne montre pas de marquage avec le LCR-A déplété alors qu'il y a marquage avec le LCR-A, cela montre que l'antigène ciblé par les auto-anticorps du LCR-A est bien AK5. 

 

J'espère que c'est plus clair pour toi, n'hésite pas à me dire si il y a encore des choses que tu ne comprends pas :))

 

Bon courage !

[davidd]

C'est de toute beauté merciiii beaucoup !!! 

 

[Midwiflower]

Salut, je rejoint le sujet car je me demande pour la D si elle pourrait être considérée comme vrai étant donné que dans le milieu on sait qu’on a mis des cellules sécrétrices de AK5 donc si on obtient des spot après la réaction avec le substrat enzyme c’est bien que des LCR ont détecté les seuls ac sécrétés qui sont des AK5 par les cellule non ? (je ne sait pas si mon raisonnement est clair mais je le pose quand même parce que j’hésitais su un item semblable)

 

[the_last_dandelion]

Coucou @newPASS_31 ! 

Alors, on te dit qu'on a des cellules exprimant AK5, pas des cellules sécrétant AK5 ; donc pour moi c'est plus une histoire d'expression au niveau de la membrane.

Et comme a dit @mariannémie, le ELISA spot permet de quantifier les cellules sécrétrices d'antigènes, et ça ne correspond pas à la situation présentée ici.