plasmide

[StabiloBoss]

Hey, dans la diapo de la prof je comprends pas trop le génie génétique à partir d'un plasmide (3 moyens d'obtenir de l'ADN dans le cours : transcriptome, génome et plasmide) 

c'est pour faire des vaccins ? 

merci d'avance 

Aussi cette phrase me porte à confusion:

insertion individuelle de chaque fragment d’ADN dans une molécule de vecteur

on met nos fragment d'ADN dans des plasmides différents, ils veulent dire quoi par molécule? 

mercii 

[Cassolnousmanque2]

Coucou @halopéridol, c'est pas forcément pour faire des vaccins, ça peut servir à des tas de choses

 

Pour la récupération de la séquence d'ADN à partir du trancriptome, ça fait référence à des notions du S1 de génome : 

Dans le schéma classique de l'expression d'un gène tu as 2 grandes étapes : ADN -> Transcription (ARNm) -> Traduction (protéine)

Ici, on va agir après l'étape de transcription : tu as un ARNm et tu veux revenir à ta séquence d'ADN de départ  

Donc tu veux faire la réaction inverse : ARNm -> ADN 

Tu utilises une reverse transcriptase qui est une ADN polymérase ARN dépendante et tu obtiens l'ADNc 

A la différence de l'ADN, l'ADNc contient uniquement les séquences reconnues comme des exons puisque les introns ont déjà été éliminés lors de la maturation post transcriptionnelle 

Ensuite tu fais une PCR pour amplifier un grand nombre de fois ta séquence d'ADNc que tu as obtenue et avoir beaucoup de matériel génétique à utiliser 

 

Pour la récupération de la séquence d'ADN à partir du génome, on va directement récupérer l'ADN génomique (chromosomique si tu préfères) avant l'étape de transcription 

A la différence de la technique précédente, on ne passe donc pas par l'ARN 

On va ensuite faire une PCR dans le même but que pour l'autre technique 

 

Enfin, pour la récupération de la séquence d'ADN à partir d'un plasmide, on va se placer chez les bactéries et on va faire une extraction plasmidique 

Ensuite, on pourra modifier le plasmide qui est un vecteur de clonage de choix et on pourra ensuite l'utiliser comme on veut 

Encore une fois, on ne passera pas par une étape intermédiaire contenant de l'ARN

 

 

[Cassolnousmanque2]

il y a 24 minutes, halopéridol a dit :

insertion individuelle de chaque fragment d’ADN dans une molécule de vecteur

on met nos fragment d'ADN dans des plasmides différents, ils veulent dire quoi par molécule? 

Le sens de la phrase c'est juste pour dire que tu prends un fragment provenant d'un plasmide donneur et que tu le mets dans un plasmide receveur. Chaque fragment est susceptible de s'intégrer dans le vecteur receveur ou non 

Donc un plasmide receveur peut intégrer 1 ou plusieurs inserts provenant de un ou plusieurs plasmides donneurs 

 

C'est plus clair pour toi ? 

[StabiloBoss]

@Cassolnousmanque2 c'est super clair pouur la première question mais pour la deuxième je comprends pas trop le mot 'insert'... 

 

[Cassolnousmanque2]

@halopéridol, l'insert c'est le fragment que tu prends dans le plasmide donneur et que tu mets dans le plasmide receveur 

donc c'est le fragment que tu récupères après avoir digéré (= coupé) le plasmide donneur et le plasmide receveur avec des enzymes de restriction (endonucléases)