Technique ELISA immunoanalyse

[Le_caillou_vert]

Coucou ! J'ai un peu de mal à bien comprendre la différence entre la technique ELISA et la ELISA indirecte. Si y a un expert qui pouvait m'expliquer ce serait top :)

[JéJUnum]

Coucou, 

Je suis pas du tout un pro mais je vais essayer de t'expliquer ce que j'ai compris

 

 

La technique directe (sandwich) permet de doser des antigènes : on a des anticorps déjà fixés dans le milieu et on ajoute l'échantillon. Dans cet échantillon il y a des antigènes dont certains vont reconnaitre l'anticorps de capture déjà dans le milieu. Puis on va ajouter un second AC (de révélation) qui va se fixer sur les antigènes qui se sont fixés avant. On a donc l'effet sandwich avec AC - AG - AC et avec l'enzyme attachée à l'Ac de révélation, on va mettre en évidence la fixation à l'antigène. 

--> Donc s'il y a révélation ça signifie que l'AC de révélation s'est bien fixé et donc qu'un antigène également s'est fixé à l'Ac de capture : ça permet de mettre en évidence la présence d'un antigène dans l'échantillon (permet de savoir si le patient a un virus recherché par exemple : on utilise dans le milieu des Ac qui reconnaissent l'antigène du virus recherché)

D'ailleurs, si le signal/couleur est plus intense, cela signifie que davantage d'antigène se sont fixé et qu'il y en avait beaucoup dans l'échantillon = c'est une analyse quantitative

 

 

Pour la technique indirecte, on veut doser cette fois des anticorps. 

Pour cela, on va cette fois avoir des antigènes déjà fixés dans le milieu et on cherche à mettre en évidence l'interaction avec des anticorps. 

On va ajouter l'échantillon contenant potentiellement des Ac qui vont se fixer aux antigènes présents. Puis on ajoute des anticorps portant l'enzyme permettant la révélation de l'interaction comme dans l'autre ELISA. On a ici Ag - AC - AC donc je pense que c'est pour ça qu'on dit indirecte (la révélation de l'antigène passe par 2 AC)

Dans ce cas, ça permet de mettre en évidence la présence d'anticorps dans l'échantillon qui reconnaissent l'antigène

- par exemple en reprenant l'exemple du virus, on peut savoir si le patient a déjà été en contact avec ce dernier

--> si on remarque avec le marquage que des Ac se sont fixés aux antigène spécifiques au virus, alors il a produit des Ac spécifique au virus et donc il y a été exposé (à cause de la réponse immunitaire primaire il y a eu production de ces anticorps)

 

 

Voila j'espère que c'est plutot clair

Attend aussi peut être la validation de tuteurs au cas ou j'ai dit des conneries mdr.

 

[Cassolnousmanque2]

Coucou @Le_caillou_vert, 

En ELISA direct, tu vas doser des antigènes 

-> Tu as un Ac de capture qui va reconnaître un Ag et on va ajouter un deuxième Ac couplé à la péroxydase qui pourra grâce à une réaction avec son substrat permettre de révéler le complexe 

 

En ELISA indirect, tu vas doser des anticorps

-> Tu as un Ag et tu vas ajouter un Ag à doser puis on ajoute un deuxième Ac couplé à la peroxydase qui va reconnaître le premier anticorps. L'action de la peroxydase sera la même, elle formera un produit soluble à partir de son substrat 

 

Je te laisse regarder les schémas sur cette fiche qui a été réalisée par la team IP : https://tutoweb.org/PDFs/Librairie/Innovations Pédagogiques/PASS/Semestre 2/UE 8,11 - RECHERCHE/S2 - Fiche - PASS - Recherche (Techniques d'étude).pdf

 

Bon courage !

 

Révélation

on a posté en même temps avec @JéJUnum, au moins tu as deux explications de la même chose, tu comprendras peut-être mieux 

 

[Le_caillou_vert]

Wow merci beaucoup à tous les deux c'est plus clair maintenant !