questions td

[dzinthesky]

salut! je peux pas assister au TD des techniques du coup j'ai plusieurs questions à poser (dsl c un peu long...) :

 

- https://zupimages.net/viewer.php?id=23/06/44ha.png je comprends pas comment on répond à l'item E "Le promoteur 2 n’est pas nécessaire pour obtenir le lapin par transgénèse additive." ni la correction : "Lors de la transgénèse additive, il n’y a pas de sélection des ovocytes fécondés recombinants." càd "sélection des ovocytes"?

 

- https://zupimages.net/viewer.php?id=23/06/ou33.png je comprends pas comment répondre aux items CDE

 

-énoncé :  https://www.zupimages.net/viewer.php?id=23/06/32ga.png et correction :https://zupimages.net/viewer.php?id=23/06/gxhg.png

pourquoi dans le calcul de la protéine A on fait 1/3 x 30? je comprends pas d'où sortent ces chiffres...

 

- j'ai pas bien compris à quoi correspond le plateau dans les chromatographies d'affinité? 

 

merci d'avance de votre aide !!

[Cassolnousmanque2]

Coucou @dzinthesky, 

1) Effectivement, pour la transgénèse additive, il n'y a aucune étape de sélection. On ne fait pas pousser des oocytes fécondés recombinant sur une boîte, comme on aurait pu le faire pour des bactéries par exemple 

 

2) On a fait une expérience de transgénèse additive 

C : On te dit que la séquence CXCL1 permet la sécrétion de CXCL1 et tu as un promoteur eucaryote constitutif donc on pourra la retrouver -> item vrai 

D : On ne peut pas être sure que la protéine sera exprimée (il y aura transcription mais on ne sait rien sur la traduction)-> item faux

E : Il y a une fusion traductionnelle entre la séquence codant pour CXCL1 et le Tag His. On pourra donc faire une chromatographie d'affinité avec colonne de Nickel ou de Cobalt qui reconnaitra le tag His 

 

3) Dans 1 mL tu as 3 mg de protéine. Tu as 10 mL donc on fait 3 x 10 = 30 mg

On te dit que tu as autant de protéine A que de protéine B que de protéine C 

Donc tu as 10 mg de protéine A, 10 mg de protéine B, 10 mg de protéine C 

On te dit qu'on récupère 1 mg de protéine A donc 1/10 = 0,1 = 10%

 

4) De quel plateau tu parles ? 

 

Bon courage ;)

[dzinthesky]

@Cassolnousmanque2 merci beaucoup !!! 

 

Il y a 17 heures, Cassolnousmanque2 a dit :

4) De quel plateau tu parles ? 

de celui là : https://zupimages.net/viewer.php?id=23/06/m69v.png

[Cassolnousmanque2]

C’est l’absorbance maximale après la charge de ton échantillon