Cours audio Lajoie

[Marmotte]

Salut est-ce que quelqu'un peut me dire si le diapo audio de Lajoie marche pour lui parce que moi ça veut pas du tout ! Et si quelqu'un a une astuce je suis preneuse ! 

[Cassolnousmanque2]

Hello hello @Marmotte, 

je suis sur mac et ça ne fonctionne pas non plus 

tu es sur quoi toi ?

[Marmotte]

il y a 4 minutes, Cassolnousmanque2 a dit :

Hello hello @Marmotte, 

je suis sur mac et ça ne fonctionne pas non plus 

tu es sur quoi toi ?

ASUS et power point marche plus donc ça fait pas l'appoint sur libre office au niveau de l'audio un peu embêtant ! 

[Sylicium14]

Salut @Marmotte, 

Je l'ai écouter ce week-end il marchait, je viens de regarder et il marche pour moi la.

Mais après pour avoir le son faut clique sur l'icone du son, fin moi il se mettait pas directement 

https://zupimages.net/viewer.php?id=23/06/knou.png 

Jsp si ça t'aide

[Marmotte]

il y a 2 minutes, Sylicium14 a dit :

Salut @Marmotte, 

Je l'ai écouter ce week-end il marchait, je viens de regarder et il marche pour moi la.

Mais après pour avoir le son faut clique sur l'icone du son, fin moi il se mettait pas directement 

https://zupimages.net/viewer.php?id=23/06/knou.png 

Jsp si ça t'aide

Le problème c'est que l'icône il s'affiche pas pour moi !

[Cassolnousmanque2]

@Marmotte, je viens de regarder sur un autre support et ça a fonctionné !!! 

L’icône du son est en bas à droite de la première diapositive 

Essaye de fermer et de rouvrir le doc, peut-être que ça va marcher 

Bon je reviens quand j’ai fini de vous faire le script 

[Marmotte]

Non toujours rien ça marche pas !

[Cassolnousmanque2]

il y a 3 minutes, Marmotte a dit :

Non toujours rien ça marche pas !

Pas grave je fais le script là 

[Marmotte]

il y a 2 minutes, Cassolnousmanque2 a dit :

Pas grave je fais le script là 

Sérieux wouaw c'est trop sympa merci beaucoup ! T'es trop génial !! Merci !!

[Cassolnousmanque2]

@Marmotte(j’écris et je modifie le message au fur et à mesure) (pour les diapos 7 à 9 je continue demain, si j’oublie rappelle moi-le)

 

Diapo 1 : Bonjour à tous, je vais donc vous présenter les compléments de cours sur l’immuno précipitation et le GST Pull Down que je n’ai pas eu le temps de faire correctement en cours cette année. 

 

Diapo 2 : Le GST Pull Down et l’immuno précipitation sont deux techniques qui permettent de répondre à des questions du type « Quels sont les partenaires protéiques d’une protéine ou quel est l’état d’activation de cette protéine ». 

En fait cela permet d’analyser une protéine en particulier dans un extrait cellulaire. C’est basé un petit peu sur le même principe que la chromatographie d’affinité et donc ces techniques permettent d’isoler la protéine de l’extrait pour l’analyser.

 

Diapo 3 : Sur cette diapositive est représenté le principe de ces deux techniques. Dans les deux cas on va mélanger un extrait cellulaire avec des billes  qui permettront d’analyser des complexes. Soit des complexes anticorps antigène et antigène qui peut -être donc deux protéines partenaires. Soit dans le cas du Pull Down, mélanger des billes recouvertes de la protéine d’intérêt qui nous servir d’appât, un peu comme de la pêche à la ligne, pour aller pêcher dans l’extrait cellulaire, les protéines partenaires de notre protéine appât. Dans les deux cas on va donc mettre en évidence des intéractions entre les protéines ou ça nous permettra de mesurer l’activité de certaines protéines pour voir dans quelles conditions elle est capable d’interagir. 

 

Diapo 4 : Dans les deux cas, les complexes vont être analysés par électrophorèse SDS PAGE et Western Blot. En effet, une fois que la manip d’interactions proprement dite a été faite, il est facile de pouvoir séparer les billes du reste de l’extrait cellulaire par simple centrifugation puisque les billes sont plus lourdes et sont capables de tomber au fond du tube lorsqu’on le centrifuge sous forme de culot de billes. Il est donc facile ensuite d’analyser les complexes qui sont liés sur les billes. Donc ces complexes sont analysés par électorphorèse SDS PAGE qui va permettre de séparer les différentes protéines qui sont présentes dans les complexes et on pourra détecter spécifiquement la présence de certaines protéines grâce à un western blot qui sera réalisé après l’électrophorèse SDS PAGE.

 

Diapo 5 : Pour expliquer un peu plus en détails cette révélation des protéines présentes dans les complexes. Donc par immuno précipitation, ce que vous allez isoler sur vos billes correspond à l’anticorps qui a permis d’immunoprecipiter la protéine rond vert avec son partenaire triangle bleu. Donc lorsque l’on fait la SDS PAGE on va séparer les deux protéines puisqu’on est en conditions dénaturantes et après transfert sur un filtre on pourra révéler la présence de la protéine verte avec un anticorps anti protéine verte et la présence de la protéine triangle bleu avec un anticorps anti triangle bleu.  Pour le pull Down c’est exactement la même chose. L’electrophorese SDS PAGE permet de séparer les protéines du complexe qui sont révélées ensuite, après transfert de l’electrophorese sur un filtre, par des anticorps spécifiques.  Nous allons voir maintenant deux exemples mettant en figure l’immunoprecipitation et le GST Pull Down et vous reverrez ces deux techniques en travaux dirigés.  

 

Diapo 6 : Le premier exemple que je vous présente est un exemple d’immunoprecipitation. Il est présente ici comme serait présente un qcm exercice.

 

Diapo 7 : Alors cette expérience d’immunoprécipitation. Tout d’abord le texte : Afin de mettre en évidence l’interaction de la protéine Vif avec MDM2, donc on fait une immunoprécipitation avec des anticorps dirigés contre MDM2. Donc ce que l’on va accrocher sur les billes ce sera des anticorps anti MDM2. Et donc si MDM2 interagir avec Vif, on aura des complexes MDM2-Vif qui seront immunoprécipités. Ensuite dans l’énoncé on vous dit que l’on utilise des extraits à partir de cellules exprimant la protéine Vif et contenant ou non la protéine MDM2, et donc cela correspond à la piste 1 et la piste 2. Cette information est retranscrite sur la figure sur l’image du western blot dans la partie numérique en fait ici en haut où vous voyez que piste 1, piste 2, vous avez bien « + » qui vous indique que vous avez bien Vif et MDM2 n’est présent que dans les manips qui ont été faites dans la piste 1, et absent dans la piste 2 (donc le plus et le moins en face de MDM2). Ensuite cette figure est divisée en deux parties : une partie avec l’analyse du lysat cellulaire et une partie qui correspond à l’analyse de l’immunoprécipitation. Tout d’abord regardons la partie lisant cellulaire. Pour la partie lysat cellulaire, elle vérifie les informations qui sont données dans le texte et dans la partie ici numérique. Donc vous voyez que la piste 1 correspond bien à un lysat qui contient MDM2, puisque sur les pistes révélées par MDM2 on a bien une tâche. Et également on a une tâche pour Vif, donc ce lysat cellulaire contient bien MDM2 et Vif. Quand on fait l’immunoprécipitation, si on fait l’immunoprécipitation de MDM2, et bien il est bien là puisqu’on le révèle ici dans la piste IP dans la piste 2, et il entraîne Vif puisque vous avez Vif qui tombe et qui est révélé ici dans cette piste. Ensuite, la deuxième condition, la piste 2. Vous avez bien des lysats cellulaires qui ne contiennent pas MDM2 donc qui contiennent Vif comme cela est indiqué pour les pistes correspondant au lysat cellulaire. Quand vous faites l’immunoprécipitation, vous voyez que vous n’avez ni Vif, ni MDM2. Alors ça peut paraître un peu bête de faire ce type d’expérience mais c’est un contrôle pour vérifier que Vif tout seul ne va pas aller s’accrocher sur les billes, car s’il s’accrochait lui tout seul sur les billes, ça serait en fait un faut positif, ça serait une manipulation faussée par le fait que Vif n’a pas besoin de MDM2 pour s’accrocher sur les billes. Voilà les expériences seront toujours représentées de cette façon là, avec une partie qui vérifie avec le lysat cellulaire, les informations qui sont données dans le texte, et une partie qui vous donne l’expérimentation de l’immunoprécipitation. Donc au final ici cette expérience permet bien de mettre en évidence, une interaction entre MDM2 et Vif. 

 

Diapo 8 : 

 

Diapo 9 : 

 

Diapo 10 : Je terminerai donc mon diaporama sur cette diapositive en espérant que vous avez bien compris le principe de l’immunoprecipitation et les méthodes de pull Down après la partie un peu théorique et les exemples surtout. Des exemples seront repris en TD pour finaliser en fait l’apprentissage de cette technique qui peut paraître un peu fastidieuse mais avec organisation on arrive à tout à fait interpréter les résultats. Voilà je vous souhaite à tous de bien terminer cette partie de l’UE 11 et d’apprécier les TD qui vous seront faits sous peu.

[çapasseouçacasse]

@Cassolnousmanque2 tu sauves beaucoup de monde là haha 

merci beaucoup !!!!!!

[Marmotte]

Vraiment merci beaucoup beaucoup @Cassolnousmanque2 c'est vraiment beaucoup trop gentil de ta part !! Merci merci pour tout ce travail !