Protéine

[Evanninho]

Bonjour j’ai qq p’tites questions sur les protéines donc j’vous les posent :

 

1) je ne comprend pas le 7A pk il est faux (correction BCE c’est le concours de 2016 maraîcher)

2)les KO/KI c’est des transgenese par recombinaison homologue ou non homologue ?

 

3)j’arrive pas à saisir la diff de rôle entre western blot et sds car pour moi elles servent toutes 2 à séparer les prot donc si qq peut m’expliquer ce qui les différencie concrètement dans leur rôle ? 
 

4)dans ce genre d’exo comment réagir face au western et aux diagrammes en même temps j’arrive pas à bien différencier quelle schéma il faut choisir pour rep aux questions entre western ou les autres donc comment faire ? ( correction exo : BD)

 

Merci d’avance !! 

[Cassolnousmanque2]

Coucou @Evanninho, 

1) Quand tu purifies une protéine, tu veux récupérer uniquement cette protéine en limitant au maximum la présence d'autres protéines. Dans ton lysat tu ne sais pas quelles protéines tu as, donc peut -être que tu auras également une protéine à 60 kDa, donc l'électrophorèse en conditions dénaturantes n'est pas une bonne technique de purification 

 

2) Ce sont des techniques de recombinaison homologue

 

3) Le SDS te permet de séparer tes protéines selon leur masse moléculaire tandis que le western blot te permet juste de regarder si la protéine d'intérêt est présente ou pas. Je te fais un exemple : soit l'échantillon 1 contenant la protéine A (25 kDa), la protéine B (50 kDa), la protéine C (25 kDa)

 

-> Tu fais ton électrophorèse SDS Page => tu obtiens 2 bandes : une à 25 kDa, l'autre à 50 kDa => tu ne sépares pas les protéines A et C 

-> Tu fais ton WB avec un anticorps anti protéine A => tu verras que la protéine A est présente mais ça ne te dit pas qu'il y a la C aussi. Pour le savoir il faudrait utiliser un anticorps anti C 

 

4) Alors tu as 3 figures qui te montrent des choses complètement différentes : 

Figure A : on regarde la quantité d'ARNm de NKP = combien

Figure B : on regarde la présence de NKP dans les différentes souches + si on a un témoin de charge : si c'est plus ou moins exprimé

Figure C : on regarde l'activité de NKP dans les différentes souches 

 

A) "Le taux" ça fait référence à la quantité -> on regarde la figure A 

Dans l'énoncé on te dit que MCF-7 et YS1-2 expriment le récepteur aux oestrogènes tandis que MDA-231 et Pli ne l'expriment pas. 

En regardant la figure tu vois bien que les taux relatifs d'ARNm de NKP sont identiques pour Pli et pour YS1-2 donc l'item A est faux. Il n'y a pas de différence significative, sinon on aurait eu une "*" pour montrer la différence

 

B) "expriment" fait référence à la présence de la protéine -> on regarde la figure B 

Dans l'énoncé on te dit que MCF10A correspond aux cellules mammaires normales. Tu vois qu'on a un témoin de charge dans cette expérience représenté par l'actine donc on peut faire une analyse semi-quantitative. On voit que la bande pour NKP dans MCF10A est beaucoup moins foncée que dans les autres souches. Par conséquence l'item B est vrai 

 

C) On raisonne comme pour la B, on reprend la figure B

On voit que YS1-2 semble être celle qui exprime le moins NKP et que MDA-231 semble être celle qui l'exprime le plus même si ce n'est pas hyper flagrant (et pas hyper précis par conséquent). Par contre entre MCF-7 et Pli, on n'a pas spécialement de grande différence donc l'item C est faux

 

D) "l'activité" ça fait référence à la figure C 

Tu vois que l'histogramme pour YS1-2 est plus haut que celui des cellules contrôle (normales MCF10A) et tu as l'astérisque "*" qui te montre que c'est significatif. Donc l'item est vrai 

 

E) Aucune figure ne montre le rôle de NKP c'est pourquoi l'item est faux 

 

J'espère que c'est plus clair pour toi 

Bon courage