enzymes de restriction

[evalanine]

Salutt,

 

j'ai une question concernant la partie techniques de bettina, quand on a un plasmide avec par exemple 3 enzymes BamH1 et 2 Pst1, on peut digérer le plasmide avec BamH1 et Pst1 ça ok mais ça veut dire que vu que notre plasmide va être coupé plusieurs fois est-ce qu'on pourra choisir la partie du plasmide qui nous intéresse pour la mettre dans un autre plasmide ? 

 

et quand on dit qu'on coupe avec BamH1 et qu'il y en a plusieurs sur le même plasmide, on peut choisir celle qui nous convient le plus du coup? 

 

mercii d'avance pour le temps que vous prendrez pour me répondre :)

[Caro-tides]

Salut ! 

Quand on ajoute une enzyme comme BamH1 avec ton plasmide, elle va couper tous les sites correspondants. Donc non, on ne peut pas vraiment choisir de couper un site et pas l'autre. Par exemple, si sur ton plasmide, tu as 2 sites BamH1, quand tu vas ajouter l'enzyme, elle va couper aux 2 sites et ton plasmides sera alors en 2 morceaux. 

Ensuite, comme ton plasmide a été découpé en plusieurs morceaux, tu peux récupérer celui qui t'intéresse (pour l'insérer dans un autre plasmide par exemple).

 

[evalanine]

d'accord ça marche, donc on est ok que quand on nous demande s'il est possible de digérer un plasmide avec telle et telle enzymes dans le but de récupérer un promoteur spécifique contenu dans le plasmide, si elles sont bien placées et etc, peu importe le nombre d'exemplaire qu'il y a de ces enzymes dans le plasmide, on pourra toujours répondre vrai à ce genre d'item ?

[Caro-tides]

Oui, c'est bien ça!

Dans les QCM, la quantité d'enzyme n'est pas vraiment importante. Ce qu'il faut bien regarder, c'est surtout si les sites de restrictions correspondent bien à l'enzyme qui est ajoutée et leurs positions par rapport au promoteur/ gène qui t'intéresse.

[evalanine]

super c'est limpide ! merci beaucoup, bonne soirée 

[Cassolnousmanque2]

Coucou @evalanine, je réagis juste sur un truc pour apporter une précision et éviter les malentendus 

il y a 44 minutes, Caro-tides a dit :

Ensuite, comme ton plasmide a été découpé en plusieurs morceaux, tu peux récupérer celui qui t'intéresse

En pratique comme tous les fragments sont contenus dans le même tube, on ne va pas réellement choisir celui qu'on veut. Il y aura une multitude de vecteurs recombinants et grâce à différents moyens de sélection (dont par exemple la sélection par les antibiotiques que vous connaissez mais ce n'est pas la seule), on récupèrera le vecteur recombinant qui nous intéresse 

[evalanine]

nickel merci beaucoup pour les précisions !! @Cassolnousmanque2