Bettina

[Jean]

Coucou j'ai une question sur ce QCM , il est hors programme non? ou alors on l'a pas encore vu psk c'est pas dans les diapos de Bettina et en + j'ai fait votre concours de l'an dernier et c'était loin d'être aussi pointu 

Merci d'avance 

 

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QCM 8 : Des chercheurs travaillant sur la procréation médicalement assistée possèdent des zygotes humains pour lesquels un allèle est muté ponctuellement sur le gène de la !-globine (!41-42), causant la !-thalassémie. Ils veulent modifier le génome de ces zygotes par la stratégie CRISPR/Cas9 afin d’obtenir des embryons dépourvus de la mutation.

A. Dans cette stratégie, l’ARN guide utilisé doit porter une séquence s’appariant de façon complémentaire et antiparallèle à l’ADN du gène de la !-globine et une séquence liant la Cas9.

2. Le système CRISPR/Cas9 repose sur la reconnaissance directe par la protéine Cas9 de ADN cible

3. Pour obtenir ces embryons, les chercheurs doivent transfecter les zygotes avec un plasmide contenant un ADN codant la Cas9 en fusion avec un signal de localisation nucléaire ; un plasmide contenant un ARN guide qui reconnaît une séquence du gène de la !-globine à proximité de la mutation !41-42 ; un plasmide contenant un ADN donneur qui porte la séquence sauvage du gène de la !-globine

4. La séquence PAM indique à la protéine Cas9 que l’ADN cible doit être clivé 3 nucléotides plus loin

5. La recombinaison homologue est nécessaire à l’obtention des embryons sans mutation"

[Cassolnousmanque2]

Coucou @JeanNeymar, 

Je laisse les RM confirmer ( @barbiedocteur @AAAAH) pour le programme de cette année mais de mon point de vue il est faisable puisque dans le diapo du Pr Couderc, elle parle bien de CRISPR Cas9 : https://zupimages.net/viewer.php?id=23/02/9h9b.png

Après je ne sais pas si elle a détaillé autant que les autres années 

(d'ailleurs tu l'as trouvé où ce qcm ? et s'ils confirment que c'est bien au programme, je te ferai la correction !!)

[barbiedocteur]

Coucou @JeanNeymar!

Effectivement la Pr Couderc en parle quand même dans son cours, quand elle explique la transgenèse par recombinaison. C'est quand même important de connaitre le principe du système CRISPR/Cas9 : C'est une technique où on transfecte des cellules avec un ARN guide et une protéine capable de couper l'ADN double brin : Cas9. On peut choisir où se fait cette coupure grâce à l'ADN guide, à condition que ce soit à un endroit où on a une région PAM. Une fois cette coupure faite, l'ADN double brin va être réparé, et le but c'est de faire apparaître des modifications dans la séquence. On utilise souvent cette méthode pour créer des KO, c'est-à-dire qu'on espère que les modifications qu'on fait apparaitre vont invalider le gène et qu'il ne pourra plus s'exprimer. 

Dans les grandes lignes c'est ça, et j'ai des notes de l'année dernière de la prof qui nous l'explique brièvement. Alors je ne sais pas si elle l'a refait cette année, mais je pense qu'elle tient quand même à ce que vous connaissiez le fonctionnement de la technique dans ses grandes lignes, pour ne pas simplement en apprendre le nom sans la comprendre :))

C'est vrai qu'il y a peu de chances pour que vous tombiez à l'examen sur un QCM entier dédié à cette technique, mais y a quelques items qui restent assez accessibles et où je ne peux pas t'assurer que c'est hors programme. 

Du coup je laisse @Cassolnousmanque2te faire une petite correction si t'en veux une mais hésite pas si tu veux des explications plus précises sur CRISPR/Cas9, je te ferai un post un peu plus complet !

[Cassolnousmanque2]

Alors déjà tu peux aussi aller voir ce post, j'ai fait une explication assez simple du système https://forum.tutoweb.org/topic/86963-crispr-cas-9/#comment-463696 et j'ai aussi mis le lien d'une vidéo 

Je te fais la correction du qcm ce soir !!

[Jean]

il y a 23 minutes, barbiedocteur a dit :

Coucou @JeanNeymar!

Effectivement la Pr Couderc en parle quand même dans son cours, quand elle explique la transgenèse par recombinaison. C'est quand même important de connaitre le principe du système CRISPR/Cas9 : C'est une technique où on transfecte des cellules avec un ARN guide et une protéine capable de couper l'ADN double brin : Cas9. On peut choisir où se fait cette coupure grâce à l'ADN guide, à condition que ce soit à un endroit où on a une région PAM. Une fois cette coupure faite, l'ADN double brin va être réparé, et le but c'est de faire apparaître des modifications dans la séquence. 

Dans les grandes lignes c'est ça, et j'ai des notes de l'année dernière de la prof qui nous l'explique brièvement. Alors je ne sais pas si elle l'a refait cette année, mais je pense qu'elle tient quand même à ce que vous connaissiez le fonctionnement de la technique dans ses grandes lignes, pour ne pas simplement en apprendre le nom sans la comprendre :))

C'est vrai qu'il y a peu de chances pour que vous tombiez à l'examen sur un QCM entier dédié à cette technique, mais y a quelques items qui restent assez accessibles et où je ne peux pas t'assurer que c'est hors programme. 

Du coup je laisse @Cassolnousmanque2te faire une petite correction si t'en veux une mais hésite pas si tu veux des explications plus précises sur CRISPR/Cas9, je te ferai un post un peu plus complet !

alors honnêtement jsp si les autres confirmeront mais j'ai souvenir qu'elle est passé extrêmement vite dessus cette année(d'ailleurs elle n'a jamais prononcé le mot PAM je crois)

Edited January 14, 2023 by JeanNeymar

[barbiedocteur]

2 minutes ago, JeanNeymar said:

elle est passé extrêmement vite dessus cette année(d'ailleurs elle n'a jamais prononcé le mot PAM je crois)

On vous fait confiance c'est vous qui êtes dans l'amphi après toutJe demande à notre référente PASS pour être sûre et je reviens vers toi si jamais elle me dit que la prof en a parlé, comme ça on élimine le doute !

[Jean]

il y a 19 minutes, barbiedocteur a dit :

On vous fait confiance c'est vous qui êtes dans l'amphi après toutJe demande à notre référente PASS pour être sûre et je reviens vers toi si jamais elle me dit que la prof en a parlé, comme ça on élimine le doute !

suuuuuper merci!

[barbiedocteur]

Re @JeanNeymarje viens aux nouvelles : Effectivement la prof est passée très vite sur le système CRISPR/Cas9, mais a quand même expliqué que c'était une enzyme qui coupe l'ADN et provoque une cassure mal réparée, ce qui permet d'obtenir des KO.

Mais elle a surtout expliqué que vous verriez ce système un peu plus en TD, et également dans le cours du Pr Ségui en UE8. 

Voilà donc pour l'instant en effet vous pouvez pas répondre à ce genre de QCM, mais vous allez avoir la chance d'en apprendre un peu plus dans les semaines qui arrivent

Voilà j'espère que ça t'éclaire un peu hésite pas si y a autre chose :)

[Jean]

il y a 6 minutes, barbiedocteur a dit :

Re @JeanNeymarje viens aux nouvelles : Effectivement la prof est passée très vite sur le système CRISPR/Cas9, mais a quand même expliqué que c'était une enzyme qui coupe l'ADN et provoque une cassure mal réparée, ce qui permet d'obtenir des KO.

Mais elle a surtout expliqué que vous verriez ce système un peu plus en TD, et également dans le cours du Pr Ségui en UE8. 

Voilà donc pour l'instant en effet vous pouvez pas répondre à ce genre de QCM, mais vous allez avoir la chance d'en apprendre un peu plus dans les semaines qui arrivent

Voilà j'espère que ça t'éclaire un peu hésite pas si y a autre chose :)

super ça confirme ce que je pensais , du coup oui je savais quand même pour la cassure non homologue en effet elle a bien développé ce point , merci pour tes réponses !

[Cassolnousmanque2]

Il y a 2 heures, JeanNeymar a dit :

super ça confirme ce que je pensais , du coup oui je savais quand même pour la cassure non homologue en effet elle a bien développé ce point , merci pour tes réponses !

Juste par contre le qcm tu l’as trouvé où ?

[AAAAH]

Coucou ! J'arrive après la guerre mais effectivement je suis d'accord avec @Cassolnousmanque2 et @barbiedocteur !

 

Merci beaucoup pour la super correction d'ailleurs 

[Cassolnousmanque2]

@JeanNeymar

A. Comme vous l'avez souvent vu, la complémentarité des bases est une notion super importante dans plein de mécanismes liés à l'ADN ou à l'ARN. L'ARN guide va permettre de reconnaître le brin complémentaire et antiparallèle de l'ADN cible, ce qui permettra à la Cas9 de couper les deux brins ! Donc l'item est bien vrai 

B. La protéine Cas9 ne va pas reconnaître directement l'ADN cible, c'est via l'ARN cible qu'elle le reconnaîtra et qu'elle pourra le cliver. Donc l'item est faux 

C. La protéine Cas9 est celle qui effectue la coupure et donc le KO. Le signal de localisation nucléaire (séquence NLS) va permettre à la protéine d'aller directement dans le noyau en passant à travers le complexe de pores nucléaires. La fusion traductionnelle entre les deux permet bien cela. L'ARN guide va permettre la reconnaissance par complémentarité avec l'ADN. L'ADN sauvage permet de remplacer le morceau d'ADN coupé. L'item est vrai 

D. Comme on te l'a dit plus haut, c'est au niveau de la séquence PAM que la protéine Cas9 sait qu'elle doit couper l'ADN. Donc l'item est aussi vrai 

E. C'est aussi vrai, si on a une recombinaison non homologue, on aura encore des mutations 

 

Voilà j'espère que c'est plus clair pour toi 

Bon courage pour la suite