est il possible dutiliser une seule enzyme de restriction?

[JenesaisPASS]

coucou :)

 

svp en faisant des qcms et lisant la correction, je me suis posée cette question, pourriez vous maider ?

 

merciii

 

si lenzyme de restriction ne coupe QUA 1 ENDROIT du vecteur, et pas 2 endroits différents, il sera quand meme possible dinsérer la séquence codante? 

[Cassolnousmanque2]

Coucou @popcorn, 

effectivement, c'est l'une des possibilités du clonage NON orienté 

Ainsi, le plasmide initial ne perdra aucune séquence, il en gagnera une donc sa taille définitive augmentera 

 

Pour t'expliquer pourquoi, à chaque fois qu'une enzyme de restriction coupe une séquence d'ADN, le site de restriction est coupé en 2 entre 2 nucléotides précis 

On se retrouve donc avec 2 demi-sites de restriction qui sont complémentaires 

Donc finalement, on part d'un plasmide avec 1 site de restriction pour l'enzyme A par exemple

On coupe le plasmide par cette enzyme A

On obtient 2 demi-sites pour l'enzyme A (sites A1 et A2)

(Parallèlement on avait digéré l'insert par l'enzyme A également donc on a 2 demi-sites pour l'enzyme A (Sites A3 et A4))

On réalise ensuite le clonage : on a toutes les possibilités suivantes : 

- Le demi site A1 va s'associer au demi site A3 et le demi site A2 va s'associer au demi site A4

ou

- Le demi site A1 va s'associer au demi site A4 et le demi site A2 va s'associer au demi site A3 

ou

- Le demi site A1 va s'associer au demi site A2 et le demi site A3 va s'associer au demi site A4 -> le clonage n'a pas fonctionné

 

Donc après insertion on se retrouvera avec 2 sites de restriction pour l'enzyme A dans les deux premiers cas 

 

Tu comprends mieux ? 

[JenesaisPASS]

Il y a 8 heures, Cassolnousmanque2 a dit :

Coucou @popcorn, 

effectivement, c'est l'une des possibilités du clonage NON orienté 

Ainsi, le plasmide initial ne perdra aucune séquence, il en gagnera une donc sa taille définitive augmentera 

 

Pour t'expliquer pourquoi, à chaque fois qu'une enzyme de restriction coupe une séquence d'ADN, le site de restriction est coupé en 2 entre 2 nucléotides précis 

On se retrouve donc avec 2 demi-sites de restriction qui sont complémentaires 

Donc finalement, on part d'un plasmide avec 1 site de restriction pour l'enzyme A par exemple

On coupe le plasmide par cette enzyme A

On obtient 2 demi-sites pour l'enzyme A (sites A1 et A2)

(Parallèlement on avait digéré l'insert par l'enzyme A également donc on a 2 demi-sites pour l'enzyme A (Sites A3 et A4))

On réalise ensuite le clonage : on a toutes les possibilités suivantes : 

- Le demi site A1 va s'associer au demi site A3 et le demi site A2 va s'associer au demi site A4

ou

- Le demi site A1 va s'associer au demi site A4 et le demi site A2 va s'associer au demi site A3 

ou

- Le demi site A1 va s'associer au demi site A2 et le demi site A3 va s'associer au demi site A4 -> le clonage n'a pas fonctionné

 

Donc après insertion on se retrouvera avec 2 sites de restriction pour l'enzyme A dans les deux premiers cas 

 

Tu comprends mieux ? 

omg c'est tellement clair merici bcp t'est trop forte