clonage qcm 3 poly printemps

[JenesaisPASS]

salut :))

 

svp jai quelques questions sur ce qcm 3 que je ne comprends pas, ce sont des questions que je me suis posee en cours (jesperais ne pas avoir a y faire face ds les qcms mais me voici...)

pourriez vous maider svp?

 

je vous remercie ENORMEMENT davance pr le temps que vous prenez 

 

juste avant je tiens a preciser que a gauche ya le debut de lenonce, et a droite de la photo ya la suite avec le qcm 3 et son corrigé

(ignorez le NO et O que jai rajouté sur mon dessin cetait avant que je comprenne les clonages orientes et non orientés)

2) je ne comprends pas pourquoi les items CD du qcm 3 ici sont corrects (jai dailleurs copié le corrigé en haut en bleu)

3)quand la sequence codante arrive dans le vecteur receveur, elle va automatiquement à la suite de son promoteur nest ce pas?

 

 

https://zupimages.net/viewer.php?id=23/02/tvjc.png

Edited January 9, 2023 by popcorn

[Cassolnousmanque2]

Coucou @popcorn, 

Alors déjà, tu réalises un clonage non orienté grâce à BamHI 

 

Pour les questions C et D : Tu commences par dessiner ton plasmide recombinant (essaye de le faire tout seul avant de regarder la correction que je te mets ici :

cas 1 : https://zupimages.net/viewer.php?id=23/02/43zy.jpeg

cas 2 : https://zupimages.net/viewer.php?id=23/02/8ja2.jpeg

Tu vois donc que tu as 2 séquences EcoRI : la première était présente dans le plasmide pRH initial (en noir), la deuxième a été rajoutée car elle appartient à l'insert (en orange)

Tu calcules la position relative de EcoRI pour voir si elle est située au milieu de l'insert ou pas : (en pratique tu vois avec l'habitude qu'elle n'est pas située au milieu mais pour bien t'expliquer et ne pas sauter d'étapes, je fais quand même les calculs)

Distance entre le premier BamHI et EcoRI = 930 - 860 = 70 pb

Distance entre le deuxième BamHI et EcoRI = 1600 - 930 = 670 pb 

 

Taille insert = 1600 - 860 = 740

Taille plasmide recombinant = 3800 + 740 = 4540 pb 

 

On calcule la nouvelle position de BamHI (le deuxième) et de EcoRI dans le plasmide recombinant : 1ere possibilité

EcoRI = 1500 + 70 = 1570 pb 

BamHI (le deuxième) = 1500 + 740 = 2240 pb

 

Ainsi, si l'insert se met dans le sens 1 tu auras les fragments suivants après digestion par EcoRI : 

Fragment 1 = 1570 - 800 = 770 pb 

Fragment 2 = 4540 - 770 = 3770 pb

 

On calcule la nouvelle position de BamHI (le deuxième) et de EcoRI dans le plasmide recombinant : 2e possibilité

BamHI (le deuxième) = 1500 + 740 = 2240 pb (ça ne change pas)

EcoRI = 2240 - 70 = 2170 pb  

 

Ainsi, si l'insert se met dans le sens 1 tu auras les fragments suivants après digestion par EcoRI : 

Fragment 1 = 2170 - 800 = 1370 pb

Fragment 2 = 4540 - 1370 = 3170 pb

 

Donc avec ces calculs on a pu répondre aux deux items : 

C : avec le clonage par BamHI tu as 2 possibilités d'insertion (clonage non orienté) donc au final tu peut déterminer le sens d'insertion par digestion avec EcoRI puisqu'un site pour EcoRI est situé sur l'insert et pas au milieu de celui-ci 

D. On a bien retrouvé les tailles données dans l'item 

 

Tu vois mieux comment ça fonctionne ? 

Bon courage

[JenesaisPASS]

Il y a 9 heures, Cassolnousmanque2 a dit :

Coucou @popcorn, 

Alors déjà, tu réalises un clonage non orienté grâce à BamHI 

 

Pour les questions C et D : Tu commences par dessiner ton plasmide recombinant (essaye de le faire tout seul avant de regarder la correction que je te mets ici :

cas 1 : https://zupimages.net/viewer.php?id=23/02/43zy.jpeg

cas 2 : https://zupimages.net/viewer.php?id=23/02/8ja2.jpeg

Tu vois donc que tu as 2 séquences EcoRI : la première était présente dans le plasmide pRH initial (en noir), la deuxième a été rajoutée car elle appartient à l'insert (en orange)

Tu calcules la position relative de EcoRI pour voir si elle est située au milieu de l'insert ou pas : (en pratique tu vois avec l'habitude qu'elle n'est âs située au milieu mais pour bien t'expliquer et ne pas sauter d'étapes, je fais quand même les calculs)

Distance entre le premier BamHI et EcoRI = 930 - 860 = 70 pb

Distance entre le deuxième BamHI et EcoRI = 1600 - 930 = 670 pb 

 

Taille insert = 1600 - 860 = 740

Taille plasmide recombinant = 3800 + 740 = 4540 pb 

On calcule la nouvelle position de BamHI (le deuxième) et de EcoRI dans le plasmide recombinant : 1ere possibilité

EcoRI = 1500 + 70 = 1570 pb 

BamHI (le deuxième) = 1500 + 740 = 2240 pb

 

Ainsi, si l'insert se met dans le sens 1 tu auras les fragments suivants après digestion par EcoRI : 

Fragment 1 = 1570 - 800 = 770 pb 

Fragment 2 = 4540 - 770 = 3770 pb

 

On calcule la nouvelle position de BamHI (le deuxième) et de EcoRI dans le plasmide recombinant : 2e possibilité

BamHI (le deuxième) = 1500 + 740 = 2240 pb (ça ne change pas)

EcoRI = 2240 - 70 = 2170 pb  

 

Ainsi, si l'insert se met dans le sens 1 tu auras les fragments suivants après digestion par EcoRI : 

Fragment 1 = 2170 - 800 = 1370 pb

Fragment 2 = 4540 - 1370 = 3170 pb

 

Donc avec ces calculs on a pu répondre aux deux items : 

C : avec le clonage par BamHI tu as 2 possibilités d'insertion (clonage non orienté) donc au final tu peut déterminer le sens d'insertion par digestion avec EcoRI puisqu'un site pour EcoRI est situé sur l'insert et pas au milieu de celui-ci 

D. On a bien retrouvé les tailles données dans l'item 

 

Tu vois mieux comment ça fonctionne ? 

Bon courage

JE COMPRENDS ENFIN COMMENT TE REMERCIER (tu prends toujours du tps pr expliquer en détail sur le forum je te souhaite de réussir tt ce que tu entreprends) MERCIIII

[Aminarthrose]

Révélation

@YannickQueNiTet @fodimethyl elle l'a mieux expliquer que moi donc lisez ce post