Transgénèse

[jlr.10]

Bonjour concernant la transgénèse il y a quelque chose que je n'ai pas bien saisit : le produit de transgénèse qui va être injecter dans un oeuf fécondé, est-ce qu'il contient (comme dans le transfert de gènes) des plasmides ayant intégrés la construction génique (qui contient le gène d'intérêt) ?

 

J'ai pas non plus compris comment se déroule la préparation de l'ADN qui sera injecter dans l'oeuf fécondé.

 

Merci d'avance pour vos réponses et le temps que vous aurez passez sur ces questions. : ) 

[AAAAH]

Coucou !

 

Effectivement dans le cours n'est pas très clair sur si la transgénèse se fait avec des plasmides ou pas. Malheureusement je suis pas assez calé pour te répondre sur ça. De ce que je comprends malgré tout, la transgénèse par recombinaison se fait directement sur l'ADN, donc on utilise pas de plasmide en dehors de la préparation du transgène. Pas sûr pour la transgénèse additive malgré tout.

 

Pour préparer le transgène, on va commencer par choisir un gène qui nous plait, et à l'ajouter à un plasmide avec un promoteur pour qu'il puisse se cloner. Ensuite, on vient vérifier que tout va bien, et qu'on a bien cloné un gène intact sans mutation. Après, on va venir extraire ce gène du plasmide, et le purifier pour ne garder que les multiples copies de ce gène et pas le plasmide qui ne nous est plus utile. Enfin, on vérifie qu'on a extrait le bon gène, sans impureté et en assez grande quantité. Quand tout cela est fini, on se retrouve avec une grosse quantité de gène pur qui peut être injecté.

 

Ensuite la transgénèse peut être effectué de 2 manière : additive ou par recombinaison.

 

La transgénèse additive consiste à modifier un œuf fécondé qui est ensuite implanté dans une femelle afin qu'il se développe. On modifie ici l'entièreté du génome de l'individu, dans le sens où toutes ses cellules comporteront le transgène même si elles ne l'exprime pas forcément toutes. Effectivement, au moment où on injecte le transgène, il n'y a qu'une cellule, qui donnera ensuite naissance à toutes les autres.

 

La transgénèse par recombinaison, elle, consiste à introduire le transgène dans des cellules souches issues du blastocystes. On ajoute le transgène, puis on remet ces cellules souches dans le blastocyste. La c'est un peu la roulette, bien qu'on soit sûr que ces cellules souches ont intégré le gène, on ne sait pas ce qu'elles deviendront dans le blastocyste. Donc en gros on prie en espérant que ce soient les cellules à l'origine des gamètes, comme ça le transgène sera transmis à la descendance et on aura une lignée transgénique. Si les gamètes sont génétiquement intactes mais qu'on a modifié le reste des cellules par exemple, on aura un individu qui exprime le transgène, mais sans le transmettre à la descendance, ce qui n'est pas le but.