Orientation

[MonsieurCarcinome]

Salut j’ai un qcm ou me dis si la cassette d’expressest orientee ou Pas en fct des enzymes de restrictions je sais pas trop comment faire

 

et deuxième question comment definir un cadre lecture dans un plasmide genre où est-ce que sa commence

 

merci

[Cassolnousmanque2]

Coucou @MonsieurCarcinome, 

il y a 17 minutes, MonsieurCarcinome a dit :

j’ai un qcm ou me dis si la cassette d’expressest orientee ou Pas en fct des enzymes de restrictions je sais pas trop comment faire

 

Tu parles de quel qcm ?

il y a 17 minutes, MonsieurCarcinome a dit :

deuxième question comment definir un cadre lecture dans un plasmide genre où est-ce que sa commence

C'est pareil qu'au S1 (en génome), ça commence à l'ATG et ça finit au codon STOP (UAG, UAA ou UGA)

[MonsieurCarcinome]

[Cassolnousmanque2]

Alors : 

A. Tu utilises deux enzymes de restriction (à priori non complémentaires puisqu'on ne te dit pas qu'elles sont complémentaires), donc le demi site de restriction pour Nnn sur l'insert pourra s'associer uniquement avec le demi site de restriction pour Nnn du vecteur 

Pareil pour le demi site de restriction pour Yyy sur l'insert qui s'associera uniquement avec le demi site de restriction pour Yyy du vecteur 

=> on a donc bien un clonage orienté puisque l'insert peut s'intégrer que dans un seul sens au vecteur plasmidique 

 

B. Le cadre de lecture se situe entre l'ATG de la GFP et le codon STOP du gène dnsLMSN (non dessinés sur le schéma). Comme tu as un clonage orienté, l'ATG sera du côté du site de restriction pour Nnn et le codon STOP sera du côté du site de restriction pour Yyy 

Le cadre de lecture du gène dnsLMSN est en phase avec celui de la GFP (je t'explique pourquoi dans l'item C)

 

C. (La formulation de l'item est un peu bizarre...) mais je pense qu'ils voulaient dire qu'à priori, si les cellules expriment la GFP, alors on aura également le gène dnsLMSN. C'est le cas puisque tu vois sur le schéma qu'on a une fusion traductionnelle entre l'extrémité 3' de la GFP et l'extrémité 5' du gène dnsLMSN (les deux gènes ne sont pas entrecoupés par une séquence blanche sur le schéma)

Ici la GFP agit comme gène rapporteur 

 

D. C'est à peu près la même question que la C même si pareil, la formulation est assez étrange

E. Tu as le calcul ici : https://forum.tutoweb.org/topic/86552-qcm-pack-poly/#comment-461708 (pour moi il manque la précision dans la question qu'on utilise Nnn et Kkk)