comment connaitre le sens d'intégration lors d'un clonage

[Gabinoooo]

Bonjour, suite au cours d'aujourd'hui avec B. Couderc, je ne comprend pas comment on arrive à déterminer le sens de l'intégration d'une séquence ciblé dans un plasmide, aprés la sélection avec un antibiotique, etc ... 

 

Merci par avance de votre réponse !

[Aminarthrose]

Révélation

@AAAAH @Cassolnousmanque2 

 

[Cassolnousmanque2]

Coucou @Gabinoooo, 

Alors il faut que tu regardes à quel endroit se trouvent les différentes structures présentes sur ton insert. En réalisant des digestions avec des enzymes de restriction bien choisies, tu obtiendras des fragments de tailles spécifiques que tu pourras faire migrer sur un gel d'électrophorèse et en fonction de l'endroit où ils migreront, tu sauras dans quel sens l'insert s'est inséré 

Bien évidemment, pour avoir plusieurs sens d'insertion possibles (2), il faut nécessairement être dans un cas de clonage non orienté 

Dans le cas d'un clonage orienté il y aura un seul sens d'insertion 

Tu comprends mieux ? 

[Gabinoooo]

Oui merci, j'ai compris, juste petite question ( légèrement bêtes sur les bords ), les nombres sur le coté des résultats d'une électrophorèse, ca correspond à la masse des différent fragments ou autre choses ?

Merci  par avance 

[Cassolnousmanque2]

@GabinooooAlors déjà il n'y a pas de question bête 

et ensuite ça correspond au nombre de paires de bases de ton fragment donc à sa taille 

[Gabinoooo]

super merci beaucoup