enzyme de restriction

[Crepanax]

Hey je sais pas si j'ai posé ma question au bon endroit oops dans le cours sur les techniques ( dans l'ue pharmacie), j'ai noté que l'enzyme de restriction BamH1 était à bout collant mais ducoup si c'est pas a bout franc je comprend pas comment le gène de la betaglobine peut s'insérer dans le plasmide "receveur", fin il manquera des morceaux  non ? c'est à dire pas le même nombre de nucleotides dans les deux brins ? Comme ya un bout de nucleotide "flottant" , je comprend pas trop

C'est dans la diapo 26 du cours de Mme Couderc :)

[sucrecannelle]

sisi tu es au bon endroit !!

 

pour BamH1 ou toute autre enzyme à bout collant : 

il faut que les séquences de l'endroit où on insère le fragment (donc sur le plasmide) et du fragment coupé lui même soient complémentaires (par le principe de complémentarité des bases) et antiparallèles (càd que l'une a une orientation de 5' en 3' et l'autre une orientation de 3' en 5')

grâce à cela le collage se fera de manière spontanée. quand ce sera fait il y aura le même nombre de nucléotides sur le gène d'intérêt et il ne manquera rien 

☞ en gros, la partie qui reste après coupure par l'enzyme et qui était complémentaire et antiparallèle au fragment d'intérêt, sera retrouvée sur le plasmide hôte pour permettre l'insertion du fragment, tu vois ce que je veux dire ?

 

j'espère que c'est assez clair, j'essaie de te trouver des schémas pour illustrer tout ça (:

 

exemple avec EcoR1 : 

 

 

exemple avec BamH1 : 

 

 

bon courage