Bonjour, Alors je n'arrive pas a comprendre comment savoir quelle amorce est la bonne pour un plasmide sachant que l'ont a juste le schémas du plasmide et une le dépôt des différente amorce sur une électrophorèse Quelqu'un pourrait m'aider svpp mercii bcpp!!!!!

Coucou @Selm, Alors pour reprendre point par point les questions du Pr Couderc : "Expliquez brièvement le principe de la technique de séquençage de l'ADN selon Sanger." Pour comprendre ce mécanisme là, il faut que tu aies bien compris comment fonctionne la réplication. Le but du séquençage et de déterminer la séquence de nucléotides présente dans ton fragment d'ADN. Pour cela, tu vas utiliser tous les composants nécessaires à la réplication (amorce, ADN matrice, ADN polymérase, sels, eau, nucléotides) et en plus des dNTP, tu vas utiliser des ddNTP. Les ddNTP ce sont des didésoxyribonucléotides. A la différence des désoxyribonucléotides (dNTP) qui n'ont pas de OH en 2' mais qui ont un OH en 3' pour réaliser les liaisons phosphodiester de 3' en 5', les ddNTP n'ont pas de OH en 2' ni en 3'. Par conséquent ils ne pourront pas former de liaisons phosphodiester, ce qui stoppera la polymérisation de l'ADN. Comme on aura préalablement étiqueté les différents ddNTP avec des colorants différents, alors cela nous permettra de savoir quel nucléotide a été incorporé, et donc de déterminer la séquence nucléotidique de l'ADN pendant sa réplication grâce à une exposition UV par exemple. Tu pourras ainsi lire la séquence d'ADN de bas en haut sur le gel d'électrophorèse ! (je t'invite à regarder les diapos 33 à 41 qui reprennent cette technique là un peu plus en détails) "Lire la séquence obtenue et l'orienter" Du coup en lisant de bas en haut ça donne : 5' AGGCTTTTCAGGCCAGTGCCGGGACCTTTTTTACAGCCGTCAA 3' (normalement si je me suis pas plantée quelque part 😅) Pour les amorces, le brin hachuré c'est celui du haut ou celui du bas ? je n'arrive pas bien à voir sur la photo)

AMORCE PLASMIDE

By Selm
January 4, 2023 in UE8/11 - Recherche

https://forum.tutoweb.org/topic/86451-amorce-plasmide/

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Go to solution Solved by Cassolnousmanque2, January 4, 2023

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