Vecteurs et plasmides

[Laulau13]

Bonjour, j’ai une question concernant les plasmides. Sur l’item 4-C des qcm du poly du TAT je ne comprend pas bien la justification donnée et pourquoi on peut dire que l’item est faux …

Est ce que quelqu’un pourrait m’expliquer à nouveau svp ?

Merci d’avance 

[Cassolnousmanque2]

Coucou @Laulau13

Je vais essayer de t'expliquer ça assez facilement, 

Alors déjà tout l'objectif de la manipulation c'est de modifier le plasmide pour qu'il soit recombinant après lui avoir ajouté un insert

On te dit qu'on va couper avec Nnn et Yyy, deux enzymes de restriction (je noterai EdR) qui sont présentes à la fois sur le vecteur et à la fois sur l'insert 

 

Or, tu as deux possibilités à la vue du vecteur et de l'endroit où on veut insérer l'insert 

Soit tu l'insères dans la partie de "gauche" entre Yyy et Nnn (je te mets un dessin de ce que ça donne)

Soit tu l'insères dans la partie de droite" entre Nnn et Yyy (je te mets aussi un dessin de ce que ça donne)

Voila le schéma pour les deux cas : https://zupimages.net/viewer.php?id=23/01/hrst.jpeg (en vert c'est l'insert, en noir le plasmide original)

 

Donc tu vois que dans un cas (à gauche), tu perds le promoteur eucaryote, le gène de résistance à la généticine (un antibiotique), la séquence polyA, le site de restriction pour l'EdR Ddd et la séquence Ori

Dans l'autre cas (à droite), tu perds les sites de restriction aux EdR Aaa, Kkk, Eee, Ddd, Ddd à nouveau, le promoteur procaryote, le gène de résistance à l'ampicilline (un antibiotique) et le terminateur de transcription

 

Tu me diras et alors comment on sait si on l'insère à droite ou à gauche ?

Pour les avoir, il faut que tu réfléchisses à quelle séquence est essentielle à la survie, au maintien du plasmide, et quelle séquence de l'est pas

Parmi toutes les séquences que je viens de te citer, seule la séquence Ori doit ABSOLUMENT être conservée, sans quoi le plasmide ne pourra pas se répliquer 

 

Or, on vous a dit normalement au S1 en génome que les plasmides se répliquent indépendamment du chromosome bactérien 

Par conséquent, si tu enlèves la séquence qui permet au plasmide de se répliquer, alors quand les bactéries se répliqueront, le plasmide ne se répliquera pas, donc on dit qu'on "perdra le plasmide"

 

Pour te faire un exemple (qui n'est pas à retenir, j'insiste, c'est juste pour que tu comprennes à quoi ça sert tout ce raisonnement dans la vraie vie) : 

Si on garde Ori : 

Si j'ai 1 cellule bactérienne avec 1 ADN chromosomique et 2 plasmides à l'intérieur 

La cellule veut se diviser pour former 2 cellules -> elle réplique l'intégralité de son matériel génétique : elle aura 2 ADN chromosomiques et 4 plasmides à l'intérieur 

Puis elle se divise et donne 2 cellules bactériennes chacune avec 1 ADN chromosomique et 2 plasmides 

 

Si on enlève Ori : 

Je prends la même cellule bactérienne avec 1 ADN chromosomique et 2 plasmides à l'intérieur 

La cellule veut se diviser pour former 2 cellules -> elle réplique son chromosome mais ne peut pas répliquer son ADN plasmidique : elle aura 2 ADN chromosomiques et 2 plasmides à l'intérieur 

Puis elle se divise et donne 2 cellules bactériennes chacune avec 1 ADN chromosomique et 1 plasmide 

=> Déjà à ce stade tu vois que les cellules filles ont perdu 1 plasmide par rapport à la cellule mère 

Maintenant si on fait une deuxième division (pour avoir 4 cellules bactériennes au total) : 

Chaque cellule veut se diviser pour former 2 cellules -> elle réplique son chromosome mais ne peut pas répliquer son ADN plasmidique : elle aura 2 ADN chromosomiques et 1 plasmide à l'intérieur 

Puis elle se divise et donne 2 cellules bactériennes chacune avec 1 ADN chromosomique et 1 plasmide ou 0 plasmide 

=> Donc finalement on obtiendra à la fin : 2 cellules bactériennes avec 1 ADN chromosomique + 1 ADN plasmidique et 2 cellules bactériennes avec 1 ADN chromosomique et 0 ADN plasmidique 

=> C'est pour ça qu'on parle de perte du plasmide en absence de la séquence Ori

 

Je pourrais continuer le raisonnement et tu verrais que plus on a de divisions des cellules, plus il y aura de cellules sans plasmide mais il y aura toujours que 2 cellules avec 1 plasmide 

 

Donc pour conclure tout ça et répondre à la question posée dans l'item, comme tu perds la séquence correspondant au gène de résistance de l'ampicilline, alors tu ne pourras pas sélectionner les bactéries recombinantes avec de l'ampicilline sinon elles vont toutes mourir

 

Voila voila, est ce que tu comprends mieux ? Ce que tu dois retenir c'est que dans ton plasmide il faut toujours conserver les séquences essentielles donc Ori et d'autres séquences si on te dit qu'elles sont essentielles à la survie de ton plasmide dans l'énoncé 

 

Bon courage