Vecteurs et plasmides

[Laulau13]

Bonjour, je ne comprend pas bien comment on fait la différence par rapport au schéma entre un clonage orienté et non orienté …

Merci d’avance 

[Cassolnousmanque2]

Coucou @Laulau13, 

Pour savoir si tu as un clonage orienté ou non orienté il faut que tu regardes si on te parle de 1 enzyme de restriction (je noterai EdR) ou si on te parle de 2 EdR

Si tu as 1 EdR tu auras forcément un clonage non orienté : l'insert pourra se mettre dans un sens ou dans l'autre 

Si tu as 2 EdR, tu auras soit un clonage orienté, soit un clonage non orienté : 

-> les deux EdR sont complémentaires -> clonage non orienté, comme dit précédemment l'insert pourra se positionner dans les deux sens 

-> les deux EdR ne sont pas complémentaires -> clonage orienté, l'insert pourra se positionner seulement dans un sens 

 

Sur le schéma, dans l'insert tu as souvent d'autres sites de restriction pour d'autres enzymes que tu n'utilises pas et tu as souvent les positions de ces sites de restriction qui sont indiquées 

En redessinant le plasmide après insertion, tu verras si l'insert est dans un sens ou dans l'autre dans le cas d'un clonage non orienté en fonction de la nouvelle localisation de ces sites de restriction

Et précisément, tu pourras faire une digestion de ce plasmide par d'autres enzymes que celles utilisées pour l'insertion et tu les feras migrer sur un gel d'électophorèse, ce qui te permettra en fonction de la taille des fragments, de savoir dans quel sens s'est insérée la séquence dans le plasmide 

 

Ça répond à ta question ? 

[the_last_dandelion]

Coucou à toi ! 

Avant de te répondre, sache que tu n'es pas dans la bonne section du forum (effectivement, il y a un sujet spécifique à la recherche (UE8/UE11), fais attention ! Ca t'évitera dans le futur de tomber sur des tuteurs pas forcément au point sur les détails des chapitres en question ! 

Sur ce, je t'invite à jeter un coup d'œil à ce post explicatif sur les différents types de clonage : 

 (et si tu as d'autres questions, les tuteurs recherche sont là pour toi ! ) 

[Cassolnousmanque2]

il y a 2 minutes, the_last_dandelion a dit :

sache que tu n'es pas dans la bonne section du forum

Révélation

Je me suis occupée de déplacer le post dans l'onglet recherche ;) j'avais même pas vu

 

[the_last_dandelion]

il y a 1 minute, Cassolnousmanque2 a dit :

Je me suis occupée de déplacer le post dans l'onglet recherche ;) j'avais même pas vu

Révélation

Merci beaucoup ! (je t'avoue que je n'avais aucune idée de comment le faire) 

 

[Laulau13]

Pardon je suis désolée je n’avais pas vu cette rubrique !

 

il y a 8 minutes, the_last_dandelion a dit :

Coucou à toi ! 

Avant de te répondre, sache que tu n'es pas dans la bonne section du forum (effectivement, il y a un sujet spécifique à la recherche (UE8/UE11), fais attention ! Ca t'évitera dans le futur de tomber sur des tuteurs pas forcément au point sur les détails des chapitres en question ! 

Sur ce, je t'invite à jeter un coup d'œil à ce post explicatif sur les différents types de clonage : 

 (et si tu as d'autres questions, les tuteurs recherche sont là pour toi ! ) 

 

il y a 9 minutes, Cassolnousmanque2 a dit :

Coucou @Laulau13, 

Pour savoir si tu as un clonage orienté ou non orienté il faut que tu regardes si on te parle de 1 enzyme de restriction (je noterai EdR) ou si on te parle de 2 EdR

Si tu as 1 EdR tu auras forcément un clonage non orienté : l'insert pourra se mettre dans un sens ou dans l'autre 

Si tu as 2 EdR, tu auras soit un clonage orienté, soit un clonage non orienté : 

-> les deux EdR sont complémentaires -> clonage non orienté, comme dit précédemment l'insert pourra se positionner dans les deux sens 

-> les deux EdR ne sont pas complémentaires -> clonage orienté, l'insert pourra se positionner seulement dans un sens 

 

Sur le schéma, dans l'insert tu as souvent d'autres sites de restriction pour d'autres enzymes que tu n'utilises pas et tu as souvent les positions de ces sites de restriction qui sont indiquées 

En redessinant le plasmide après insertion, tu verras si l'insert est dans un sens ou dans l'autre dans le cas d'un clonage non orienté en fonction de la nouvelle localisation de ces sites de restriction

Et précisément, tu pourras faire une digestion de ce plasmide par d'autres enzymes que celles utilisées pour l'insertion et tu les feras migrer sur un gel d'électophorèse, ce qui te permettra en fonction de  la taille des fragments, de savoir dans quel sens s'est inséré le plasmide 

 

Ça répond à ta question ? 

Oui oui j’ai mieux compris merci !

mais je ne comprend pas encore bien comment on fait pour redessiner le plasmide après l’insertion …

[the_last_dandelion]

il y a 2 minutes, Laulau13 a dit :

Pardon je suis désolée je n’avais pas vu cette rubrique !

 

Il n'y a pas de soucis ! Le plus important c'est que tu tombes sur des tuteurs pour te répondre :))

[Cassolnousmanque2]

il y a 31 minutes, the_last_dandelion a dit :

Merci beaucoup ! (je t'avoue que je n'avais aucune idée de comment le faire) 

Révélation

Tu ne peux pas je crois, c'est pour ça , c'est que les RM qui ont la fonctionnalité il me semble 

 

 

il y a 29 minutes, Laulau13 a dit :

mais je ne comprend pas encore bien comment on fait pour redessiner le plasmide après l’insertion …

je te fais un schéma et je t'envoie ça 

Pour le clonage non orienté : https://zupimages.net/viewer.php?id=23/01/wk5b.jpeg

Pour le clonage orienté https://zupimages.net/viewer.php?id=23/01/7dmt.jpeg

 

C'est plus clair pour toi ? 

[the_last_dandelion]

il y a 18 minutes, Laulau13 a dit :

mais je ne comprend pas encore bien comment on fait pour redessiner le plasmide après l’insertion …

En fonction de si ton clonage est orienté ou pas du coup, tu te retrouves avec 1 ou 2 possibilités : 

- Clonage non-orienté : ton plasmide d'origine est coupé au niveau du site de l'EdR : l'insert peut se positionner de "droite à gauche" (orange au début et vert à la fin) ou de "gauche à droite" (vert au début, orange à la fin).

- Clonage orienté : comme ton plasmide est coupé à deux endroits différents par deux EdR différentes (EdR 2 et EdR 3), ton insert peut uniquement se placer dans le sens des enzymes : EdR 2 au début (rouge) et EdR3 à la fin (violet).

 

Révélation

@AAAAH et @barbiedocteursi vous pouviez checker que je dis pas n'importe quoi 

 

Edited January 3, 2023 by the_last_dandelion

[Laulau13]

il y a 19 minutes, Cassolnousmanque2 a dit :

 

je te fais un schéma et je t'envoie ça 

Pour le clonage non orienté : https://zupimages.net/viewer.php?id=23/01/wk5b.jpeg

Pour le clonage orienté https://zupimages.net/viewer.php?id=23/01/7dmt.jpeg

 

C'est plus clair pour toi ? 

Oui la c’est plus clair merci beaucoup