Vecteur plasmide

[Evanninho]

Bonjour j’ai pas trop compris ce schéma qq peut me l’expliquer svp 

[Cassolnousmanque2]

Coucou @Evanninho, 

Alors en fait c'est un schéma de plasmide (ADN Double Brin (je noterai DB))

Normalement vous avez vu au S1 que les bactéries peuvent posséder des plasmides d'ADN, c'est une représentation schématique de ça 

Les flèches représentent des promoteurs 

ORI est l'origine de réplication du plasmide (qui se réplique indépendamment du chromosome bactérien)

Les rectangles représentent des séquences d'ADN 

Les séquences de résistance à l'ampicilline ou à d'autres antibiotiques te permettront de sélectionner les bactéries compétentes après transformation ou transfection 

Les enzymes de restriction sont des ENDOnucléases qui vont couper au milieu de l'ADN DB au niveau de séquences particulières de 6 nucléotides 

C'est en coupant par des enzymes de restriction qu'on pourra insérer des fragments dans le vecteur plasmidique 

 

Les numéros c'est l'endroit où sont placées les séquences par rapport au 0 : ORI, tu pourras donc calculer la taille de ton plasmide après intégration de l'insert (comme si tu faisais un calcul de distance : le plus grand - le plus petit = taille de la séquence d'intérêt)

 

Est-ce que c'est plus clair pour toi ?

[Evanninho]

@Cassolnousmanque2ok Oue oue je vois mieux merci bcp et donc les promoteurs eucaryotes c’est pour indiquer les protéines recombinantes que l’on va utiliser sur l’homme . Elles sont donc sur le vecteur plasmide actuellement c’est bien ça ? 

[Cassolnousmanque2]

@EvanninhoAlors actuellement sur ton vecteur plasmide tu as : 

- l'ADNc de la bêta globine sous le contrôle d'un promoteur normal (donc qui n'est pas en permanence exprimé) 

- l'ADNc de la zéocine sous le contrôle d'un promoteur constitutif donc en permanence exprimé 

 

Tu pourras utiliser cela chez des organismes eucaryotes oui, par contre les protéines sous le contrôle du promoteur procaryote ne pourront pas l'être (l'ampicilline ici)