Orientation plasmideB

[rptm]

Bonjour, je suis un peu en galère avec les qcms de génome! Notamment celui qu'on a fait en td : le qcm 3 du concour 2011 j'arrive pas à comprendre comment on voit si c'est dans la bonne orientation pour les plasmides pcr ... Et j'ai trouvé les même types de questions au qcms 7 du concours 2010 ! Si quelqu'un pouvait m'éclairer ca m'aiderait beaucoup !!! 

[Paul_M]

Salut, si je me souviens bien, pour voir ça il te faut regarder si le promoteur l'ATG et le codon stop sont bien positionnés dans cet ordre, sachant que le promoteur est déjà sur le plasmide non recombinant.

[rptm]

Mais c est quoi le rapport avec la compatibilité des sites de restrictions et l orientation?!!

[Guest Boris]

Bonjour,

 

Je suppose que tu voulais traiter le QCM 4 du concours de 2011 ^^

A. On digère le produit de PCR avec Acc I et EcoRI, il faut regarder si dans la séquence des sites, on retrouve ces deux derniers dans le bon sens de 5' en 3'.

Or, EcoRI est avant AccI, donc normalement, il devrait être inséré dans le mauvais sens. Mais si on digére le plasmide avec ClaI qui est compatible avec AccI, on peut l'insérer dans le bon sens. Item vrai.

B. La digestion par TaqI coupe la séquence à isoler voir QCM précédent (on a la présence d'un site dès le début). Item Faux

C.Ici, on digère le plasmide, donc le produit de PCR sera forcément à l'envers. Item Faux.

D. Pour les mêmes raisons que petit A avec cette histoire, d'extrémités compatibles entre AccI et TaqI. Item vrai.

E. Ici, Taq va reconnaitre dans le site de restriction les parties de AccI et TaqI ce qui va enlever le site EcoRI donc une non intégration du plasmide. Item Faux.

Voili voilou ^^

[rptm]

Merci beaucoup !! Je crois que j ai compris , en faire j avais pas fait la nuance entre les questions sur les plasmides et celles sur pcr !