Fiche qcm IP génome

[mathouxdu31]

Bonjour à tous, je viens de lire la fiche innovations pédagogiques d'aide à la résolution d'un qcm de réflexion en génome et dans l'item A je n'arrive pas à comprendre ce qu'est l'ADN matrice dans le contexte d'une RT-PCR, est-ce que quelqu'un pourrait me l'expliquer svp ? 

 

[Cassolnousmanque2]

Hello @mathouxdu31, 

Dans la PCR tu as l'utilisation d'une Taq polymérase qui va amplifier ta séquence d'ADN

Dans le cas de la RT-PCR, tu vas d'abord avoir une étape supplémentaire, c'est la reverse transcription de l'ARNm mature en ADNc puis tu auras le brin complémentaire à cet ADNc et tu pourras donc faire une PCR "classique" 

Le brin matrice c'est le brin sur lequel la Taq Pol va venir se fixer pour ajouter des nucléotides complémentaires et synthétiser le brin d'en face 

J'espère que c'est plus clair ! 

Bon courage

[mathouxdu31]

il y a 2 minutes, Cassolnousmanque2 a dit :

Hello @mathouxdu31, 

Dans la PCR tu as l'utilisation d'une Taq polymérase qui va amplifier ta séquence d'ADN

Dans le cas de la RT-PCR, tu vas d'abord avoir une étape supplémentaire, c'est la reverse transcription de l'ARNm mature en ADNc puis tu auras le brin complémentaire à cet ADNc et tu pourras donc faire une PCR "classique" 

Le brin matrice c'est le brin sur lequel la Taq Pol va venir se fixer pour ajouter des nucléotides complémentaires et synthétiser le brin d'en face 

J'espère que c'est plus clair ! 

Bon courage

D'accord donc si je comprends bien le brin matrice utilisé pour la partie PCR "classique" d'une RT-PCR va être le brin d'ADNc synthétisé à partir de la reverse transcription, ou pas du tout ? sinon oui c'est déjà plus clair merci beaucoup :)

[Cassolnousmanque2]

Tout dépend de quel brin tu amplifies donc ça peut être les deux brins 

Si tu prends la séquence suivante (ARNm mature) : 

5' AUGUCGUCGGAUAGCUA 3' 

 

Après reverse transcription tu as : 

 

5' ATGTCGTCGGATAGCTA 3' 

 

-> Taq pol 

3' TACAGCAGCCTATCGAT 5' 

 

Alors ton brin matrice c'est celui du bas 

 

et si 

5' ATGTCGTCGGATAGCTA 3' 

                                Taq pol <-

 

3' TACAGCAGCCTATCGAT 5' 

 

Alors c'est le brin du haut 

[mathouxdu31]

il y a 15 minutes, Cassolnousmanque2 a dit :

Tout dépend de quel brin tu amplifies donc ça peut être les deux brins 

Si tu prends la séquence suivante (ARNm mature) : 

5' AUGUCGUCGGAUAGCUA 3' 

 

Après reverse transcription tu as : 

 

5' ATGTCGTCGGATAGCTA 3' 

 

-> Taq pol 

3' TACAGCAGCCTATCGAT 5' 

 

Alors ton brin matrice c'est celui du bas 

 

et si 

5' ATGTCGTCGGATAGCTA 3' 

                                Taq pol <-

 

3' TACAGCAGCCTATCGAT 5' 

 

Alors c'est le brin du haut 

Merci j'ai compris ce principe mais du coup j'ai une autre question maintenant désolée, comment on passe d'un simple brin d'ARN à un double brin d'ADN, je ne suis pas sure, il me semblait (mais je me trompe peut-être) qu'il y avait une hybridation ARN/ADNc et qu'après l'ARN était détruit donc on se retrouve avec un simple brin d'ADNc mais après je ne vois pas comment on passe au double brin d'ADN sur lequel va agir la Taq pol pour l'amplifier. Désolée, normalement ça devrait être ma dernière question. Merci bcp :)

 

[Cassolnousmanque2]

il y a 5 minutes, mathouxdu31 a dit :

Désolée, normalement ça devrait être ma dernière question

T'inquiète pas tu peux en poser d'autres on est là pour ça ;) 

il y a 6 minutes, mathouxdu31 a dit :

hybridation ARN/ADNc et qu'après l'ARN était détruit donc on se retrouve avec un simple brin d'ADNc

Oui parce que les ARN sont très instables 

 

Pour le premier cycle tu auras un seul brin d'ADNc puis après 2 puis 4 puis 8 puis 16 etc (tu multiplies par 2 à chaque fois) grâce à l'action de la taq pol 

C'est plus clair ou pas ? 

[mathouxdu31]

il y a 1 minute, Cassolnousmanque2 a dit :

T'inquiète pas tu peux en poser d'autres on est là pour ça ;) 

Oui parce que les ARN sont très instables 

 

Pour le premier cycle tu auras un seul brin d'ADNc puis après 2 puis 4 puis 8 puis 16 etc (tu multiplies par 2 à chaque fois) grâce à l'action de la taq pol 

C'est plus clair ou pas ? 

oui c'est bon j'ai compris, merci beaucoup tu m'as beaucoup aidée :)

[Cassolnousmanque2]

pas de soucis et n'hésite pas si tu as encore des questions après ! 
Bon courage !!