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[StabiloBoss]

Hey, je n'arrive pas a comprendre comment on répond à l'items E, comment je peux savoir que j'ai exactement 18 carbone pour l'acide gras et pas 16 par exemple ? Et aussi les réactions cité  n'ont pas toute lieux en même temps on recommence l'expérience sur un nouveaux lipide à chaque fois ? parce que si je fais tt dans l'ordre perso pour le PC j'obtiens à la fin juste un AG simple que je peux pas hydrolysé avec une lysophopholipases ??

 

 

QCM 6
Après purification partielle de phospholipides membranaires, on sépare 2 spots principaux par 
chromatographie sur support polaire (silice) et en utilisant un système de solvants adéquat 
(chloroforme/méthanol/eau, 100/42/6), l'un migrant au niveau des phosphatidylcholines (P, spot 
migrant le plus haut, de Rf 0,4), l'autre au niveau des sphingomyélines (spot S, de Rf 0,25). Pour 
confirmer ces structures, on effectue une série de tests chimiques ou biochimiques:

 
1. Soumis à une hydrolyse alcaline "ménagée" (qui hydrolyse les liaisons esters carboxyliques) 
le spot P est partiellement hydrolysé et forme un produit lipidique qui migre avec un Rf de 0,2 
et un autre produit qui migre avec un Rf de 0,9. Le spot S est insensible à l'hydrolyse alcaline 
"ménagée". 
2. Soumis à l'action d'une sphingomyélinase (de stricte spécificité), le spot P reste inchangé, 
tandis que le spot S disparait (et donne un produit qui migre avec un Rf de 0,7).
3. Soumis à l'action d'une phospholipase C (de stricte spécificité), le spot S reste inchangé, tandis 
que le spot P disparait (et donne un produit qui migre avec un Rf de 0,85).

 

4. Soumis à l'action d'une phospholipase A2, le spot S reste inchangé, tandis que le spot P 
disparait et donne un produit LP1 qui migre avec un Rf de 0,15. Ce produit LP1 (de Rf 0,15) 
est soumis à son tour à l'action d'une lysophospholipase: une partie résiste à l'action de cette  lysophospholipase (ce produit résistant est nommé LP2), et une partie est hydrolysée libérant 
un produit lipidique qui migre avec un Rf de 0,9. 

 

5. LP2 résiste à l'hydrolyse alcaline "ménagée", mais est hydrolysé par hydrolyse acide à chaud 
et libère un produit lipidique identifié comme de l'octadécanol. 

 

On peut conclure de ces expériences que : 
A. Le spot S est pur et présente toutes les caractéristiques de la sphingomyéline.
B. Le spot P est pur et présente toutes les caractéristiques de la phosphatidylcholine.
C. Le spot S est 1 mélange de sphingomyéline et d’un autre lipide résistant à la sphingomyélinase.
D. Le spot P est un mélange de phosphatidylcholine et d'un autre lipide résistant à l'action de la 
phospholipase A1.
E. Le spot LP2 est un 1-octadecyl-sn-3-glycero-phosphocholine.

 

[Insolence]

Salut @zinez!

Je reprends l'énoncé :

 

Après purification partielle de phospholipides membranaires, on sépare 2 spots principaux par chromatographie sur support polaire (silice) et en utilisant un système de solvants adéquat 
(chloroforme/méthanol/eau, 100/42/6) :

- l'un migrant au niveau des phosphatidylcholines (Rf 0,4) => Spot P (hydrophobe +)

- l'autre au niveau des sphingomyélines (Rf 0,25) => Spot S (hydrophobe -)

Attention "migration au niveau de telle espèce"  ≠ "fait partie de telle espèce"

 

Pour confirmer ces structures, on effectue une série de tests chimiques ou biochimiques:

 
1. Soumis à une hydrolyse des liaisons esters carboxyliques :

Spot P est partiellement hydrolysé et forme deux produits :

- un produit lipidique qui migre avec un Rf de 0,2 (hydrophobe -) (glycérophosphocholine)

- un produit qui migre avec un Rf de 0,9 (hydrophobe +) (2 même AG ?)

Le spot S est insensible à l'hydrolyse alcaline "ménagée" : normal il n’y a pas de liaison ester dans un sphingomyéline

 

2. Soumis à l'action d'une sphingomyélinase (de stricte spécificité) :

le spot P reste inchangé (normal vu que c’est un phospholipide).

Le spot S disparaît (normal vu que c’est une sphingomyéline) et donne un produit qui migre avec un Rf de 0,7 (hydrophobe ++ → certainement une céramide). Mais normalement on devrait avoir 2 produit après action de la sphingomyélinase → 1 céramide + 1 phosphocholine (hydrophobe -). Donc peut être que S ne contient pas de phosphocholine.

 

3. Soumis à l'action d'une phospholipase C (de stricte spécificité) :

Le spot S reste inchangé c'est normal vu qu'une phospholipase qui plus est de forte spécificité ne réagit qu'avec les phospholipides.

Le spot P disparaît et donne un produit qui migre avec un Rf de 0,85 (hydrophobe ++ → moins hydrophobe que le produit obtenu après première hydrolyse donc ce n'est pas un AG libre → diglycérides ?)

 

4. Soumis à l'action d'une phospholipase A2 :

Le spot S reste inchangé

Le spot P disparaît et donne un produit LP1 qui migre avec un Rf de 0,15 (hydrophobe - → lysophosphocholine ?).

Ce produit LP1 est soumis à son tour à l'action d'une lysophospholipase:

- une partie résiste à l'action de cette  lysophospholipase. Ce produit résistant est nommé LP2 (n'est pas une lysophosphocholine)

- une partie est hydrolysée libérant un produit lipidique qui migre avec un Rf de 0,9 (hydrophobe++ → AG libre → PC pure). 

 

5. LP2 résiste à l'hydrolyse alcaline "ménagée", mais est hydrolysé par hydrolyse acide à chaud 
et libère un produit lipidique identifié comme de l'octadécanol (= alcool gras → LP2 est en fait un ether-phospholipide sans AG car resistant à l’hydrolyse alcaline). 

 

On peut conclure de ces expériences que : 

A. Le spot S est pur et présente toutes les caractéristiques de la sphingomyéline. → Marqué vrai mais le fait qu'il y ai un seul spot après action des sphingomyélinases je trouve ça étrange.

 

B. Le spot P est pur et présente toutes les caractéristiques de la phosphatidylcholine. → Non pas pur mais mélange de PC et d’ether-lipide (LP2).

 

C. Le spot S est 1 mélange de sphingomyéline et d’un autre lipide résistant à la sphingomyélinase. → Non.

 

D. Le spot P est un mélange de phosphatidylcholine et d'un autre lipide résistant à l'action de la 
phospholipase A1. → Oui car LP2 à un alcool gras sur son carbone 1. Si il avait été sur son carbone 2 on aurait constaté la présence de LP2 dès le test à la phospholipase A2

 

E. Le spot LP2 est un 1-octadecyl-sn-3-glycero-phosphocholine. → Oui : octadecanoyl = acide gras et octadecyl =alcool gras selon votre cours

 

J'espère avoir pu t'aider :)

 

Edited November 18, 2022 by Insolence

[StabiloBoss]

je commence un peu à comprendre je pense que c'est vraiment toute les données de l'énoncé qui m'embrouille mais du coup la céramide est plus hydrophobe que la phosphocholine ? En général le phosphate est hydrophobe ou hydrophile ? Mercii poour l'aide en tt cas ;) 

[Insolence]

à l’instant, zinez a dit :

céramide est plus hydrophobe que la phosphocholine

La céramide est extrêmement hydrophobe alors que la phosphocholine n'a pas d'AG donc peu hydrophobe.

il y a 2 minutes, zinez a dit :

le phosphate est hydrophobe ou hydrophile

Le phosphate est plus hydrophile.

[StabiloBoss]

dernière question les grouupement (choline, Ethanolamine...) lorsqu'il sont présent ils vont rendre la molécule plus hydrophiles du coup ? 

[Insolence]

à l’instant, zinez a dit :

dernière question les groupement (choline, Ethanolamine...) lorsqu'il sont présent ils vont rendre la molécule plus hydrophiles du coup ? 

Je dirais que oui, ils vont la rendre moins hydrophobe. Ils sont polaires donc quand ils se fixent à un diacylglycérol, ils donnent à la molécule une propriété amphiphile. C'est pour ça que les phospholipides forment des liposomes.